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【研究目的】基因组完整性对于生物体的生存是至关重要的，DNA损伤应答通过逆转外源性和内源性DNA损伤促进分裂细胞忠实传递基因组，并且对于复制期间细胞生存也是必要的。由于染色体不稳定和肿瘤之间存在密切联系，推测DNA损伤应答系统缺陷可能对乳腺癌发生发展起主要的促进作用。DNA拓扑异构酶II (3结合蛋白1(TopBPl)、共济失调毛细血管扩张突变和Rad3相关蛋白（ATR)是DNA损伤应答网络的两个重要成员，而且TopBPl对于ATR的充分激活是必需的。既往研究显示TopBPl和ATR的突变或多态性与人类肿瘤发病风险相关，本研究通过构建组织芯片利用免疫组化方法检测这两个蛋白在乳腺癌，特别是三阴性乳腺癌中的表达，并分析与临床病理参数的相关性，旨在阐明TopBPl和ATR是否在乳腺癌发生发展中发挥重要作用，并为三阴性乳腺癌临床治疗策略的选择提供一定的理论基础。【研究方法】第一部分：从上海长海医院和黄浦区中心医院收集272例乳腺癌组织和118例癌旁组织构建组织芯片，使用免疫组化Envision法检测TopBPl和ATR的表达情况，兔抗人多克隆抗体购自英国Abeam公司。每个病例根据染色强度计分和阳性细胞百分比计分的乘积综合评定为染色阴性或阳性。相关临床病理信息如患者年龄、绝经状态、病理类型、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期以及ER、PR、HER2、p53状态等都收集起来以进行相关性分析。数据统计使用SPSS19.0软件进行。分析癌组织和癌旁组织间蛋白表达率的差异以及蛋白表达与临床病理参数之间的关系使用Pearson卡方检验，分析TopBPl和ATR表达水平间的相关性使用Spearman秩相关，影响蛋白表达的多因素分析采用logistic回归。所有统计检验均为双侧，以P<0.05为差异有统计学意义。第二部分：从上海新华医院收集78例三阴性乳腺癌组织和53例配对的癌旁组织制成组织芯片，同样使用免疫组化方法检测TopBPl和ATR的表达情况。所有78名患者加上第一部分研究中的46名三阴性乳腺癌患者均进行生存随访。使用SPSS19.0软件进行统计操作。分析配对的三阴性乳腺癌与癌旁组织间蛋白表达率的差异使用McNemar检验，蛋白不同表达水平间患者的总生存期（OS)使用Kaplan-Meier法估计并进行log-rank检验，影响生存的独立预后因素使用Cox回归模型进行评估。【研究结果】第一部分：236例浸润性乳腺癌组织和113例癌旁组织同时获得TopBPl和ATR的实验结果。免疫组化染色显示TopBPl在正常乳腺上皮几乎完全表达在细胞核，而在乳腺癌组织中为胞核胞浆同时染色的异常表达。ATR在癌组织和癌旁组织均为胞核染色。与癌旁组织相比较，TopBPl和ATR在乳腺癌组织中的表达率显著性增高（P<0.001)。TopBPl表达在PR阳性和p53阴性乳腺癌中显著增高，而ATR表达在肿瘤大小为T1、分期I期、HER2阴性和三阴性乳腺癌亚组中显著降低(P<0.05)。TopBPl和ATR的表达水平间未发现相关性。多因素logistic回归显示TopBPl表达与PR显著性相关，ATR表达与肿瘤大小显著性相关。第二部分：74例三阴性乳腺癌组织和53例配对的癌旁组织同时获得了TopBPl和ATR的免疫组化染色结果。加上来自第一部分的46例，总共有120例三阴性乳腺癌进入统计分析。与配对的癌旁组织相比，TopBPl在三阴性乳腺癌组织中的表达率显著性增高（P<0.001)，而ATR在两者间的表达差异无统计学意义。TopBPl低表达与淋巴结阳性显著相关（P<0.01)，而ATR表达水平与三阴性乳腺癌临床病理参数间均未发现相关性，TopBPl和ATR的表达水平之间也未发现相关性。三阴性乳腺癌患者按照不同的TopBPl、ATR和TopBPl/ATR表达水平分组的生存差异均无统计学意义，Cox回归模型显示TNM分期是影响三阴性乳腺癌患者总生存的独立预后因素。【研究结论】在乳腺癌组织中TopBin和ATR的表达水平显著性增高但二者之间未发现相关性。TopBPl在乳腺癌细胞中出现胞核胞浆异位表达现象，且表达水平在乳腺癌中与PR和p53显著性相关，在三阴性乳腺癌亚组中与淋巴结转移显著性相关，这些都提示TopBPl在乳腺癌发生发展中可能发挥重要作用。ATR的表达水平在乳腺癌中与肿瘤大小、TNM分期、HER2状态、三阴性表型相关，与其发挥DNA损伤应答功能相一致，而与三阴性乳腺癌各临床病理参数间均未发现相关性，其在乳腺癌发生发展中的作用尚需进一步研究。Cox回归模型提示TNM分期是影响三阴性乳腺癌患者总生存的独立预后因素。使用顺钼等DNA交联剂化疗可能是三阴性乳腺癌患者治疗的合理选择。