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阪崎克罗诺杆菌(Cronobactersakazakii)是一种新近发现的食源性致病菌,能够以乳粉为载体引起新生儿严重的菌血症、小肠结肠炎和脑膜炎。目前,对阪崎克罗诺杆菌的毒力因子与致病性报道不多,对阪崎克罗诺杆菌的致病机理还无定论。本研究通过对前期经脉冲场凝胶电泳(Pulse field gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)和肠杆菌基因间重复序列PCR分型(ERIC-PCR)实验得到的18株代表性阪崎克罗诺杆菌分离株进行乳鼠肠尸比初筛实验,结合初筛结果和菌株来源信息(食品品牌、食品类型、采样时间和地点等)及MLST分型结果(不同ST型),确定3株菌用于乳鼠致病性研究。在侵袭乳鼠致病实验中,通过记录阪崎克罗诺杆菌感染乳鼠后可能引发的病症特征,HE染色确证乳鼠组织病理变化,结合血液染菌和细胞因子检测结果,证明了阪崎克罗诺杆菌的致病性。通过全基因组重测序,将初筛得到的8株阪崎克罗诺杆菌序列与标准菌株ATCC BAA894序列进行了差异性分析,部分揭示了阪崎克罗诺杆菌的致病机理。主要研究结果如下:(1)根据肠尸比实验,18株阪崎克罗诺杆菌毒力筛选结果表明菌株12-12(2)、14-15(1)和 36-8-1 毒力较强,菌株 6-16(2)和 5-9(1)毒力一般,菌株 2-9-1、3-11(1)和7-17(1)毒力较弱。综合菌株来源信息和MLST分型结果,选取菌株2-9-1(ST4)、14-15(1)(ST93)和36-8-1(ST4)用于乳鼠侵袭和致病性研究。(2)阪崎克罗诺杆菌对乳鼠的侵袭研究结果表明:数量级为109cfu/mL浓度的菌液灌饲乳鼠,在为期7 d的饲喂过程中,试验组和对照组均无乳鼠死亡。乳鼠处死后,试验组乳鼠的肠、肝、肾、脾和脑组织较空白对照组切片病变特征明显,毒力最强的菌株36-8-1侵袭乳鼠后的组织病理学病变尤为明显。菌株与病变特征的关系呈现菌株毒力越强则病变特征越发明显的趋势。(3)阪崎克罗诺杆菌侵袭乳鼠后血液分析结果显示该菌未进入血液。(4)被侵袭乳鼠血清中TNF-α、IL-1因子及LDH活力检测结果表明:试验菌株与空白对照组相比所测指标的含量均呈显著性增加。毒力较强的ST4型菌株36-8-1侵袭乳鼠后血清中的 TNF-α(538.030 ng/L)、IL-1(148.895 pg/mL)和 LDH(2765.32 U/L)的含量均为最高,且TNF-α和LDH含量与其它2株实验菌相比均有显著差异。(5)阪崎克罗诺杆菌全基因组重测序结果表明:与阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC BAA894相比,毒力较弱的菌株7-17(1)和毒力一般的菌株5-9(1)与其他菌株的SNP分析结果存在明显的差异,InDel分析中,毒力一般的菌株5-9-1的插入突变、缺失突变及CDS区InDel最多。毒力较强且为ST4型的36-8-1的插入突变、缺失突变及CDS区InDel均比较低。综上所述,阪崎克罗诺杆菌14-15(1)(ST93)和36-8-1(ST4)毒力较强,对乳鼠致病性较强,阪崎克罗诺杆菌2-9-1(ST4)毒力较弱,对乳鼠致病性较弱。