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为了寻找影响绵羊IMF沉积的候选基因并研究其在不同肌肉组织中mRNA表达的变化规律,并分析其表达对IMF沉积产生的影响。本研究选取敖汉细毛羊2、4、5、6、12月龄公羊各5只,采集背最长肌、股二头肌、腹部脂肪、皮下脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织样,并用索氏提取法检测肌肉组织IMF含量,用实时荧光定量PCR法检测样品中HSL、PPARγ、FAS和FAM134B基因的mRNA表达水平,并分析其与IMF含量的相关性。结果如下: 1.随着月龄不断的增加,不同部位肌肉IMF含量都是逐渐的增加,5月龄羔羊IMF沉积最快,而5月龄后的IMF含量则变化不大保持在相对稳定水平;同月龄中的背最长肌IMF含量均极显著高于股二头肌(P<0.01)。 2.肌肉HSL基因表达的发育性变化及其对IMF的影响。背最长肌HSL基因的表达量呈下降-上升-下降趋势,2月龄表达量最高,4月龄与12月龄差异不显著(P>0.05),其余各时期之间均差异极显著(P<0.01);股二头肌HSL基因的表达量呈下降-上升-下降趋势,2月龄表达量最高,2月龄与6月龄差异不显著(P>0.05),其余各时期间差异极显著(P<0.01)。对同月龄不同部位肌肉HSL表达量分析发现:5、6月龄背最长肌与股二头肌差异不显著(P>0.05),2、4、12月龄背最长肌极显著高于股二头肌(P<0.01)。背最长肌HSL的表达量与IMF含量呈负相关,相关系数为-0.812,差异不显著;股二头肌HSL的表达量与IMF含量呈负相关,相关系数为-0.427,差异不显著。说明HSL基因的表达可能抑制肌肉IMF的沉积。 3.肌肉PPARγ基因表达的发育性变化及其对IMF的影响。背最长肌该基因的表达量呈先下降后上升趋势,除5、6月龄差异不显著,其余各时期之间均差异极显著(P<0.01);股二头肌该基因的表达量先下降后稳定,2、4月龄差异极显著(P<0.01),5、6、12月龄间差异不显著(P>0.05)。对同月龄不同部位肌肉PPARγmRNA表达量分析发现:背最长肌均极显著高于股二头肌(P<0.01)。背最长肌PPARγ的表达量与IMF含量呈显著负相关(P<0.05),相关系数为-0.914;股二头肌PPARγ的表达量与IMF含量呈负相关,相关系数为-0.595,差异不显著。说明PPARγ基因的表达对肌肉IMF沉积具有一定的抑制作用。 4.肌肉FAS基因表达的发育性变化及其对IMF的影响。背最长肌FAS基因的表达量呈上升趋势,2月龄与4月龄差异不显著(P>0.05),其余各时期之间均差异极显著(P<0.01);股二头肌FAS基因的表达量呈上升趋势,2月龄与4月龄和6月龄与12月龄均差异不显著(P>0.05),其余各时期间差异极显著(P<0.01)。对同月龄不同部位肌肉FAS表达量分析发现:5月龄背最长肌极显著高于股二头肌(P<0.01),其余各月龄差异不显著。背最长肌FAS的表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.940;股二头肌FAS的表达量与IMF含量呈正相关,相关系数为0.644,差异不显著。说明FAS基因的表达可能促进肌肉IMF的沉积。 5.肌肉FAM134B基因表达的发育性变化及其对IMF的影响。FAM134B在所选组织中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,而在肺中的表达量最低。背最长肌FAM134B基因的表达量先上升后下降,到6月龄时最高,且各月龄间差异极显著(P<0.01);股二头肌FAM134B基因的表达量先上升后缓慢下降,6月龄达到最高,与12月龄差异不显著,其余各时期差异极显著(P<0.01)。对同月龄不同部位肌肉FAM134B基因表达量分析发现,2、4月龄背最长肌和股二头肌差异不显著(P>0.05),5、6、12月龄背最长肌均极显著高于股二头肌(P<0.01)。背最长肌FAM134B的表达量与IMF含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数r=0.991;股二头肌FAM134B的表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05),相关系数r=0.886,说明FAM134B基因对肌肉IMF沉积可能起到一定的促进作用。 6.肌肉FAM134B基因与PPARγ、FAS和HSL的关系。背最长肌FAM134B的表达量与PPARγ表达量呈显著负相关(P<0.05,r=-0.956);与FAS表达量呈显著正相关(P<0.05,r=0.880);与HSL表达量呈负相关(P>0.05,r=-0.450);股二头肌FAM134B的表达量与PPARγ含量呈极显著负相关(P<0.01,r=-0.992);与FAS表达量呈显著正相关(P<0.05,r=0.907);与HSL表达量呈负相关(P>0.05,r=-0.036)。说明FAM134B mRNA表达量可能是通过提高促脂肪合成基因表达,抑制促脂肪分解基因表达而对IMF进行调控。 综上所述:FAM134B、FAS可以作为促进IMF沉积的候选基因,PPARγ、HSL可以作为抑制IMF沉积的候选基因;FAM134B可能通过提高促脂肪合成基因表达,抑制促脂肪分解基因表达调控IMF。