微小RNA MiR--205通过下调整合素α5调控三阴乳腺癌转移机制的研究

• 作 者: 肖雅娟
• 机 构: 南方医科大学
• 出 处: 南方医科大学
• 发表日期: 2019年10期
• 关键词: 三阴乳腺癌

背景：据统计乳腺癌是全球女性发病率及致死率最高的恶性肿瘤。其中三阴性乳腺癌虽然发病率只占乳腺癌的10％-20％,但其具有复发率高、易发生远隔器官转移、临床预后差等特点。尤其目前为止并缺乏经论证足够有效的靶向治疗方法，晚期疾病主要依赖化疗。微小RNA在乳腺癌的发生、发展表观遗传学调控发挥着重要作用，而miR-205正是三阴性乳腺癌微小RNA表达谱中与预后相关的异常表达的一员。整合素家族是细胞表面介导细胞外基质和免疫球蛋白超家族分子相互结合的异质二构体受体，虽然本身不具备激酶功能，但可以通过招募并激活激酶介导下游信号通路。整合素α5是整合素家族的亚单位的一个成员，其表达与功能与乳腺癌的侵袭性密切相关。
　　目的：1、研究miR-205在三阴乳腺癌中的表达水平及其功能、意义。
　　2、研究miR-205对整合素α5的调控及其作用。
　　3、研究整合素α5在三阴乳腺癌中的表达及其功能意义。
　　4、探究miR-205/整合素α5调控三阴乳腺癌转移的下游分子机制。
　　方法：通过生物信息学对GEO、TCGA等数据库进行分析，比较miR-205及整合素α5在乳腺癌亚型间的表达水平，以及其表达水平对乳腺癌、三阴乳腺癌生存、预后的影响。应用实时定量PCR检测miR-205在乳腺癌细胞系中的表达水平。应用免疫印迹法比较整合素α5、ZEB1、E-cadherin、Vav2、pSrc在不同乳腺癌细胞株中的蛋白表达水平。用慢病毒感染法，在三阴乳腺癌细胞株中重新表达miR-205、整合素α5。通过Crspr Cas9方法敲除细胞中的整合素α5。通过MTT法、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell迁移实验、Matrigel细胞侵袭实验、肿瘤球形成实验研究三阴乳腺癌细胞株的增殖、迁移、侵袭及干细胞特性。通过异种肿瘤裸鼠模型研究不同三阴乳腺癌细胞株的在体转移和生长能力。通过Pull-down、CoIP等实验研究蛋白间的相互作用。
　　结果：1、miR-205在三阴乳腺癌中较其他表型表达水平低且与患者的复发、远隔转移、不良生存相关。
　　2、miR-205在三阴乳腺癌中的重新表达抑制了其生长、转移及干细胞特性。
　　3、整合素α5是miR-205的直接靶蛋白，miR-205、整合素α5双表达使三阴乳腺癌细胞的生长、转移及干细胞特征重新恢复。
　　4、整合素α5在三阴乳腺癌细胞株中高表达，与乳腺癌的转移、复发正相关。促进了三阴乳腺癌的生长、转移、及干细胞特性。
　　5、miR-205通过下调整合素α5抑制Src、Vav2激活从而抑制Rac1通路，并减少了片状伪足的形成，进一步抑制三阴乳腺癌细胞株的迁移、侵袭功能。
　　结论：miR-205在三阴乳腺癌中的低表达导致了整合素α5的高表达，进一步通过激活Src/Vav2/Rac1通路促进了三阴乳腺癌的增殖、转移和干细胞特性的恶性特征。