农杆菌介导的gshI和pcs基因转化翦股颖和烟草研究

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利用植物修复重金属污染土壤是一种廉价并且可行的修复技术。发现的大部分超富集植物由于生物量小,限制了其在植物修复方面的应用。通过将重金属耐受性相关的基因转入具有较大生物量的植物中,为植物修复技术提供了一个新的策略。 本研究建立了高效的“胚性愈伤诱导→愈伤组织分化”的转基因受体体系,并通过农杆菌介导法将大肠杆菌来源的gshⅠ和拟南芥来源的pcs基因分别转入翦股颖中,期望得到一种富集重金属的草坪草,为以后的工作提供基础材料。 本研究通过改变农杆菌介导法的一些参数,期望能使农杆菌介导法得到优化。 主要结果如下: 1.从大肠杆菌(E.coli)中克隆gshⅠ基因,从拟南芥中克隆pcs基因,各自构建到pCAMBIA13011质粒上组成表达载体。 2.通过农杆菌介导法将构建好的表达载体转入翦股颖中,获得gshⅠ转基因再生植株58株,其中PCR阳性株6株,阳性株比率为10.3%,获得pcs转基因再生植株16株,其中PCR阳性株1株,阳性株比率为6.25%。对部分PCR阳性株进行Southern杂交检测,证明外源基因已经整合到植株基因组中,而且拷贝数较低,为1-2个拷贝。 3.改变农杆菌介导法的一些参数,并通过GUS瞬时检测对转化效率进行比较,结果发现超声波处理可以提高转化效率;转化时用农杆菌与愈伤一起暗处感染的效果较直接农杆菌滴加到愈伤上好;转化前愈伤预先在含100μMAS继代培养基上预培养1天没有提高转化效率。 4.通过叶盘法将构建好的表达载体转入烟草中,获得gshⅠ转基因植株13株,其中PCR阳性株11株,获得pcs转基因植株22株,其中PCR阳性株18株。转基因植株通过室外栽培已经收获T1代种子。
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