【摘 要】
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在人胰岛素原C肽序列中设计插入一段编码KGD多肽的基因，并通过基因合成的方法得到人胰岛素原突变体KGD-mut-proinsulin全长序列。将KGD-mut-proinsulin基因插入到4种不同的表
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在人胰岛素原C肽序列中设计插入一段编码KGD多肽的基因，并通过基因合成的方法得到人胰岛素原突变体KGD-mut-proinsulin全长序列。将KGD-mut-proinsulin基因插入到4种不同的表达载体：pETBlue-2，pET21a，pET30a和pGEX-4T-1，经SDS-PAGE检测，该突变体基因只有和载体pGEX-4T-1构成的重组基因在大肠杆菌中存在高效表达。重组基因在低温诱导条件下，表达出的含GST标签的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。包涵体经6M尿素变性、梯度透析脱尿素、GST亲和层析或者SephacrylS-200分子筛层析，获得的融合蛋白纯度达90％以上。经SDS-PAGE检测，融合蛋白分子量在3310左右，与理论值相符，但是抗血小板聚集活性检测显示，纯化后的融合蛋白无血小板聚集抑制活性。利用凝血酶切割透析后的融合蛋白，经Tricine-SDS-PAGE检测，目的蛋白被凝血酶切割下来，分子量7kD，与理论值相符。但经PAGE检测，酶切后的目的蛋白和GST标签依靠非共价键结合形成蛋白聚合体，尝试利用不同的变性剂打开蛋白问的非共价键，并对目的蛋白的分离纯化进行了初步摸索。
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