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目的:生殖健康是近些年讨论的热点，男性精液的质和量呈逐渐下降趋势，其影响因素是多方面的，环境污染是重要影响因素。在中国，由于生产工艺和技术的落后，以及管理不善，环保观念的薄弱，使得近些年的重金属污染情况日趋严重。锰作为重金属的一种，既是人体所需的微量元素之一，又是职业危害因素之一。锰参与人体的多种功能活动，微量的锰被机体吸收后，可进入睾丸组织参与精子的生成。锰缺乏时会出现性欲低下和不育，表现为生殖功能抑制，精子成熟受阻等；但过量的锰也会对雄性生殖系统产生影响，现有的研究表明，过量的摄入锰会对雄性生殖系统造成损伤，使睾丸萎缩、精子数量减少、畸形精子数增加等。
该实验研究中，以原代培养大鼠睾丸支持细胞(SC)为模型，以氯化锰(MnCl2)为染毒物，用实时荧光定量PCR(real time Q—PCR)和Westernblot方法检测MnCl2对支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf)和抑制素B(INH B)的mRNA转录水平和蛋白表达量的影响，探讨MnCl2对雄性生殖功能影响的作用机制，为进一步研究Mn对雄性生殖系统的毒性提供理论支持。
方法:
1．支持细胞体外培养：选取18～20d的清洁级雄性Sprague Dawley大鼠，分离提取Sertoli细胞。
2．Cell Counting Kit—8(CCK—8)法检测细胞生长状态：将Sertoli细胞以细胞浓度为2．0×104个/ml接种于96孔培养板，每板接种6个复孔，在450 nm测吸光度，绘制细胞生长曲线。
3．MTT法确定染毒浓度：以1．0×10—2mol/L、1．0×10—3 mol/L、1．0×10—4 mol/L、1．0×10—5 mol/L、1．0×10—6 mol/L、1．0×10—7 mol/L、1．0×10—8mol/L、1．0×10—9mol/L的MnCl2工作液染毒Sertoli细胞，培养24h，用酶标仪在492nm测量吸光度，确定染毒浓度。
4．荧光实时定量PCR法检测ABP、Tf和INH B mRNA的表达量：以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L的MnCl2工作液染毒Sertoli细胞，染毒24h，提取Sertoli细胞的总RNA进行逆转录后，检测ABP、Tf和INH B mRNA的转录水平。
5．Western blot法检测ABP、Tf和INH B的蛋白表达量：以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L的MnCl2工作液染毒Sertoli细胞，提取Sertoli细胞的蛋白，用Westernblot法检测ABP、Tf和INHB的蛋白相对表达量。
结果:
1．细胞培养结果：通过两步酶法，提取的SD大鼠支持细胞存活率达到95％以上，培养48 h后细胞基本完全铺开，生长良好，经胰酶纯化后Sertoli细胞纯度达90％以上。
2．CCK—8法测定结果：培养4～8 d的细胞数量相对比较稳定，代谢旺盛，选择培养至第5d的细胞进行研究。
3．MTT法测定结果：检测各染毒组处理24 h后的Sertoli细胞OD值，经计算，IC50=200μmol/L，选择1/4 IC50、1/2 IC50和IC50，即50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L为染毒浓度。
4．荧光实时定量PCR结果：各浓度组Sertoli细胞ABP、Tf和INH B mRNA均能持续表达，三者的mRNA转录水平在各染毒组均降低，与对照组相比，差异均有统计学意义。
5．Western blot结果：ABP蛋白相对表达量在各染毒组均降低，与对照组比较差异有统计学意义；Tf的蛋白相对表达量在100μmol/L和200μmol/L两个浓度组与对照组比较差异有统计学意义；INH B的蛋白相对表达量在200μmol/L浓度组与对照组比较差异有统计学意义。
结论:氯化锰在该染毒剂量下可降低Sertoli细胞ABP、Tf和INH B mRNA转录及蛋白的表达水平，提示氯化锰可能通过抑制ABP、Tf和INH B基因表达而损伤支持细胞功能。