【摘 要】
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水生生物病毒和细菌混合感染以及病毒感染后继发性的细菌感染在养殖业中较为普遍,但是目前尚缺乏混合感染致病机理的研究,严重制约了有效防控措施的制定。本实验室在鳃出血病的流行病学调查中发现,鲤疱疹病毒II（Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2）感染通常伴随着细菌的混合感染,提示CyHV-2与细菌的混合感染或继发性感染可能与鳃出病的高死亡率有一定的关联。为此,本实验拟在鳃出血病的流行
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水生生物病毒和细菌混合感染以及病毒感染后继发性的细菌感染在养殖业中较为普遍,但是目前尚缺乏混合感染致病机理的研究,严重制约了有效防控措施的制定。本实验室在鳃出血病的流行病学调查中发现,鲤疱疹病毒II（Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2）感染通常伴随着细菌的混合感染,提示CyHV-2与细菌的混合感染或继发性感染可能与鳃出病的高死亡率有一定的关联。为此,本实验拟在鳃出血病的流行病学调查基础上,分析病毒/细菌混合感染的致病效应及其病原变化规律,并通过组织病理学和转录组分析等阐明CyHV-2引发细菌继发感染的病理基础和分子机制,为鳃出血病临床防控措施的制定提供理论基础。主要研究结果如下:1.养殖异育银鲫携带CyHV-2及继发性细菌感染的流行病学调查自鳃出血病发病塘中采集典型患病鱼,分别检测CyHV-2及细菌感染。结果显示患病鱼脾、肾的病毒载量为10~8～1012copies/μg DNA,同时自肝、脾、肾可分离出细菌,鉴定的菌株包括气单胞菌、不动杆菌、芽孢杆菌、肠杆菌、弧菌等,大多数为肠道正常菌群。无菌条件下人工感染CyHV-2后继发性感染的细菌种类也主要是肠道正常菌群。说明CyHV-2急性感染后易引发细菌的继发性感染。2.鲤疱疹病毒Ⅱ与嗜水气单胞菌混合感染的致病性及病原动力学以异育银鲫为对象,通过CyHV-2/AH人工混合感染,结合病毒滴度和细菌滴度,分析混合感染的致病性及其病原的互作。结果显示:CyHV-2感染后第3天继发感染AH死亡率最高,CyHV-2感染后第14天继发感染AH不引起死亡。与此对应的是CyHV-2感染后第3天继发感染AH,病毒急剧增加,且病毒和细菌的滴度均显著高于单独感染组,CyHV-2感染后第14天继发感染AH,病毒滴度和细菌的滴度均显著低于单独感染组。这些结果说明CyHV-2感染后第3天发生细菌继发感染的特定混合感染模式中,病毒与细菌存在协同致死效应,CyHV-2感染后第14天发生细菌继发感染,病毒与细菌存在拮抗效应。3.CyHV-2致细菌继发感染的病理及分子机理通过肠道组织病理切片研究混合感染的病理机制,结果显示CyHV-2感染后第3天,肠道组织出现明显病变,肠粘膜损伤严重,说明CyHV-2感染为肠道细菌转位创造了条件。通过脾脏转录组学分析混合感染的分子机制,结果显示CyHV-2感染后第3天,MHCI基因表达水平显著上调,MHCII基因表达水平显著下调,且肠粘膜免疫球蛋白的产生通路MHCII---TCR---AID---CCR9---CCL25基因表达水平显著下调,这些结果表明病毒感染激活了宿主抗病毒免疫,且病毒感染后鱼体抗原呈递和吞噬作用减弱,提示病毒感染导致机体对肠道细菌的控制失衡,使转位的肠道细菌在体内大量增殖,引发更高的死亡率。
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