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目的:研究消化内镜铜绿假单胞菌生物膜对邻苯二甲醛、戊二醛和过氧乙酸等临床常用高水平消毒剂的抗性和抗性率,并探讨其与耐消毒剂基因qac E△1-sul1之间的相关性。方法:1.铜绿假单胞菌生物膜的建立将内镜Teflon管道与硅胶返回管、储液瓶、蠕动泵相连,共同形成一个密闭式循环系统进行灌注。2.生物膜活菌计数及观察将铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853菌悬液连续灌注至Teflon管道内,分别在灌注的第2天、第4天和第6天后采用超声振荡法和涡旋振荡法对Teflon管上形成的生物膜进行分离,再取1 m L经梯度稀释后菌悬液接种至营养平板中,计算其在不同培养天数下细菌菌落数。对不同培养天数下生物膜进行电镜扫描观察,最终确定生物膜最佳生长天数。3.试验菌株生物膜对三种消毒剂的抗性及抗性率采用最小抑菌浓度试验和最小杀菌浓度试验分别检测标准菌株ATCC 27853生物膜与22株试验菌株生物膜对三种消毒剂的抗性及抗性率。4.耐消毒剂基因qacE△1-sul1聚合酶链式反应检测采用聚合酶链式反应技术对22株试验菌株分别进行qac E△1-sul1基因检测,分析qac E△1-sul1基因与三种消毒剂抗性之间的相关性。5.统计方法采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析。计量资料采用均数±标准差表示,并采用单因素方差分析、秩和检验和卡方检验对数据进行统计分析。检验水准以α=0.05,P<0.05为统计学有差异。结果:1.对内镜铜绿假单胞菌进行生物膜培养,并确定生物膜最佳生长期为6天。2.邻苯二甲醛、戊二醛和过氧乙酸对标准菌株ATCC 27853生物膜的MIC值分别为5300 mg/L,4000 mg/L和600 mg/L,MBC值同MIC值。3.邻苯二甲醛对22株试验菌株生物膜的MIC值区间为4700 mg/L~5500mg/L,MBC值区间为5100 mg/L~5500 mg/L;戊二醛对22株试验菌株生物膜的MIC值区间为2000 mg/L~8000 mg/L,MBC值区间为4000 mg/L~10000 mg/L;过氧乙酸对22株试验菌株生物膜的MIC值区间为400 mg/L~800 mg/L,MBC值区间为400 mg/L~1200 mg/L。4.以标准菌株ATCC 27853生物膜的MIC值作为抗性判定标准,邻苯二甲醛、戊二醛、过氧乙酸的抗性率分别为63.64%、36.36%和9.10%;以标准菌株菌ATCC 27853的MBC值作为抗性判定标准,邻苯二甲醛、戊二醛、过氧乙酸的抗性率分别为86.36%、59.10%和36.36%。5.采用并联的方法,试验菌株生物膜对邻苯二甲醛、戊二醛和过氧乙酸的抗性率分别为86.36%、59.10%和36.36%;采用串联的方法,试验菌株对其抗性率分别为63.64%、36.36%和9.10%。6.在本文试验中,耐消毒剂基因qac EΔ1-sul1阳性率为18.18%,qac E△1-sul1基因阳性或基因阴性的试验菌株生物膜与三种消毒剂的MIC值和MBC值均无统计学差异。7.当以标准菌株ATCC 27853生物膜的MIC值和MBC值分别作为消毒剂抗性判定标准时,并联试验和串联试验均显示抗性组与非抗性组菌株qac E△1-sul1阳性率之间均无统计学差异。结论:1.对内镜铜绿假单胞菌进行生物膜培养,并确定生物膜最佳生长时间为6天。2.试验菌株生物膜对临床使用高水平消毒剂存在一定程度抗性,其中对邻苯二甲醛抗性程度最高,戊二醛抗性次之,过氧乙酸抗性最低。3.聚合酶链式反应结果显示22株试验菌株中qac E△1-sul1基因呈阳性的菌株有4株,阳性率为18.18%。4.qac EΔ1-sul1基因阳性或基因阴性的试验菌株生物膜与三种消毒剂的MIC值和MBC值之间关系不明显。5.并联试验和串联试验均显示抗性组与非抗性组试验菌株生物膜与qac E△1-sul1阳性率之间关系不明显。