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本论文对蜜环菌菌索多糖进行了分离纯化,得到了两种多糖成分 AMP-1、AMP-2,并对AMP-1进行了研究。研究的内容如下: 蜜环菌菌索多糖的提取与纯化:蜜环菌菌索打粹后,进行水提,经过醇沉、浓缩合并上清,最后经过DEAE-纤维素柱色谱(cl-1型)分离,得到了2种多糖成分AMP-1、AMP-2.采用苯酚-硫酸法,测得AMP-1为均一组分,AMP-2有两种组分;冷冻干燥后测其得率分别是14.7％,5.7％。 蜜环菌菌索多糖对胰岛原代细胞的活性影响:通过原位静止消化法和Ficoll不连续密度梯度法对大鼠胰岛进行分离纯化,并采用DTZ法对大鼠原代胰岛进行形态鉴定,最后通过MTT法探讨了AMP-1对AXN损伤的大鼠原代胰岛细胞的活性影响。结果如下:大鼠胰腺消化的最佳条件是胶原酶的浓度是1 mg/mL,冲盈量是6~8 mL,消化温度是38±1℃,消化时间是10～12 min,消化液pH值是7.6±0.1,并按上述条件进行分离纯化,大鼠胰岛的收获量平均是277±13个胰岛/胰腺。当AMP-1浓度在100～500 mg·L-1范围时,AMP-1能显著提高AXN损伤的大鼠原代胰岛细胞的活性。 蜜环菌菌索多糖对AXN损伤的胰岛细胞功能的影响:培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的AMP-1(2、10、50、100、500、1000 mg·L-1),用MTT法测细胞存活率;使用放免法检测不同浓度AMP-1对INS-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌量的变化;用比色法检测 INS-1细胞一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)等指标的变化。结果如下:AMP-1可减少AXN对INS-1细胞的损伤,AMP-1处理组的INS-1细胞存活率增加;在2.8 mmol·L-1、5.6 mmol·L-1、16.7 mmol·L-1葡萄糖刺激下,AMP-1(50、100、500、1000 mg·L-1)剂量依赖性地促进了INS-1细胞葡萄糖刺激性的胰岛素分泌;AMP-1能使INS-1细胞NOS活性降低,MDA和NO含量减少,同时增强了SOD的活性,增加了GSH的含量。 蜜环菌菌索多糖对AXN损伤的胰岛细胞的抗凋亡作用:培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的AMP-1(10、50、100、500、1000 mg·L-1),通过DNA琼脂糖电泳和用分光光度法检测INS-1细胞中Caspase-3活性来检测AMP-1对AXN损伤的INS-1细胞凋亡的影响。结果如下:在AMP-1处理组中,AMP-1浓度在50～1000 mg·L-1范围时,AMP-1对AXN引起的INS-1细胞的凋亡现象有着显著的抑制作用。 以上结果表明AMP-1能显著提高AXN损伤的INS-1细胞的抗氧化能力,其保护作用的机理也许就在于此。