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桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶,历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症,现代药理研究表明,桑叶有效成分之一多羟基生物碱具有显著的降血糖作用,而1-脱氧野尻霉素(DNJ)为桑叶中多羟基生物碱的一种特征性成分(一种糖苷酶抑制剂) ,是降血糖的主要活性成分。由于其在治疗糖尿病,抗病毒,抗癌等方面有显著的效果,因而引起了国内外大量学者的关注。目前,DNJ主要是采用硅烷衍生化后用GC-MS法鉴定其结构,因其分子结构中缺少发色团,很难采用高效液相色谱法直接测定含量。为了建立起一种能够快速,准确,可靠的DNJ检测方法,本实验做了以下三项工作:1在研究工作中,首先采用结构与DNJ非常相似的哌啶作为替代物与2,4–二硝基氟苯进行衍生,从而研究其反应机制和相关要素。结果得到以下结论: (1)本反应非常容易进行,且在常温下30分钟即可完全反应。(2)对于反应产物2,4-–二硝基苯基哌啶进行紫外扫描,显示它在374nm处有最大吸收, A=εCL得出其摩尔消光系数ε=17000(图),熔程为91.5°C -92°C。2从蚕沙浸膏中分离出了DNJ纯品,为接下来的工作奠定了基础。将含生物碱的蚕沙浸膏用甲醇溶解,旋转蒸发干,与硅胶按照1: 30湿法上硅胶柱,然后依次用水饱和氯仿,氯仿-甲醇-水20: 6: 0.5和20: 8: 0.5进行剃度洗脱,得到较纯的DNJ,将其在甲醇中重结晶3次,得到纯品。3建立了2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的方法。桑叶干粉经0.1 %的醋酸甲醇溶液提取、活性炭脱色后,在加入NaHCO3的甲醇溶液的条件下,DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相-紫外检测器测定。流动相为乙腈-0.1 %醋酸甲醇(25:75,V/V),流速为1.0 mL/ min,柱温:10°C。线性范围为0.16μg/ mL至8.14μg/ mL,(相关系数r=0.9994),检出限为0.03μg /mL。实验测得桑叶中DNJ含量为0.30 %;平均回收率为96.8 %;RSD为2.0 %(n=6)。此种检测方法能够简便、快速、准确地测定桑材料中的DNJ含量,为今后深入开发蚕桑材料中的DNJ提供了重要的参考和基础,并为建立DNJ的质量标准提供可靠的分析方法。