论文部分内容阅读
目的：
建立传统经典方法与分子生物技术相结合的系统化微生物鉴定模式，提高临床标本中可培养、难培养、不可培养病原菌的鉴定准确性和敏感性。
方法：
(1)将临床分离株、经VITEK32系统鉴定，％id＜99.9凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)128株，按鉴定率高低分为三组：Ⅰ组：％id90～9845株，Ⅱ组：％id80～9053株，Ⅲ组：％id＜8030株，分别用分子检测技术——16S rRNA基因序列分析法鉴定，比较VITEK32和16S rRNA基因序列分析法鉴定结果的一致性，两种方法鉴定结果不一致的菌株用API Staph系统鉴定。
(2)对47位北京同仁医院眼科诊断为眼内炎患者的玻璃体样本，同时进行直接涂片、微生物培养、生化表型鉴定、16S rRNA基因PCR和序列分析，比较不同检测方法的敏感性和特异性。
结果：
(1)Ⅰ组样本45株，VITEK32系统和16S rRNA基因序列分析法鉴定结果完全一致；Ⅱ组样本53株，VITEK32系统和16S rRNA基因序列分析法鉴定结果一致的有45株，不一致的有8株；Ⅲ组样本30株，VITEK32系统和16S rRNA基因序列分析法鉴定结果一致的有20株，不一致的有10株。不一致的样本，API法鉴定结果与16S rRNA基因序列分析法相同。
(2)47例玻璃体样本，直接涂片革兰染色检测、传统培养法检测、非培养PCR法检测阳性率分别为16/47、17/47、25/47，合计阳性率为32/47；三种检测方法报告时间最快分别为涂片法1小时，PCR法4小时，细菌培养法初步结果24小时。
结论：
16S rRNA基因序列分析法鉴定结果稳定可靠，非培养PCR法检测阳性率高，临床实验室有条件可将分子微生物诊断技术，如16S rRNA基因PCR和序列分析法引入常规检测流程。将传统经典方法与现代分子技术相结合，建立系统化微生物鉴定的新型模式，提高可培养、难培养、不可培养病原菌的检出率，为深入研究病原微生物的感染机理提供有效的手段。