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目的构建功能化组织工程真皮支架——负载纳米银的胶原-丝素蛋白真皮支架(collagen-fibroin scaffolds loaded with silver nanoparticles,NAg-CFS),并对其微观结构及生物学性能进行初步评价,为纳米银在组织工程真皮中的应用寻找新的载体及可行的方式。方法通过胃蛋白酶消化与酸抽提相结合的方法,从牛跟腱中获取Ⅰ型胶原。通过脱胶、盐析、透析等步骤从桑蚕蚕茧中获取丝素蛋白。将5mg/mL的胶原蛋白和5mg/mL的丝素蛋白以1:1的体积比配制成混合溶液,随后将10mmg/mL的纳米银溶液与胶原-丝素蛋白溶液以1:1000的体积比混匀,通过冷冻-冻干法制备出负载纳米银的胶原-丝素蛋白真皮支架(NAg-CFS)和不负载纳米银的胶原-丝素蛋白真皮支架(CFS)。以NAg-CFS为实验组,CFS为对照组,用扫描电子显微镜观察上述两种支架的微观结构。取18只雄性SD大鼠,在每只大鼠背部脊柱中线两侧制作4个直径为2cm的圆形全层皮肤缺损创面,在同一只大鼠背部创面交叉移植两种支架(NAg-CFS和CFS),行同体对照,缝合后加压包扎。在术后第7、14、28天,分别取6只SD大鼠,对创面进行观察、拍照,获取组织标本后过量麻醉处死。通过苏木素/伊红(HE)染色观察创面炎性细胞浸润和真皮再生情况,通过CD68免疫组织化学染色显示创面的巨噬细胞,并用RT-PCR技术检测创面IL-6、IL-10的mRNA相对表达水平。采用Student-t检验对数据进行统计分析。结果(1)扫描电镜观察结果显示,CFS和NAg-CFS的微观结构相似。(2)大鼠创面大体观察的结果显示,实验组创面周围炎症反应较轻,且支架与组织结合更牢固;而对照组创面周围的炎症反应较强,支架更容易脱落。(3)苏木素/伊红(HE)染色结果显示,在术后观察的各个时相点,与对照组相比,均可见实验组支架及创面内部的炎症细胞较少、新生组织生长速度较快。(4)CD68免疫组织化学染色及阳性细胞计数结果显示,在术后第14和第28天,实验组支架及创面内部的巨噬细胞浸润数量显著少于对照组。(5)RT-PCR结果显示,在术后第7、14、28天,在实验组创面上,促炎因子IL-6的mRNA相对表达量均低于对照组,且均有显著性差异;而实验组创面抗炎因子IL-10的mRNA相对表达量在术后第14天明显高于对照组,具有统计学意义(p<0.05),在第7天高于对照组但无显著性差异。结论本实验成功构建了负载纳米银的胶原-丝素蛋白真皮支架,并初步探讨该支架在大鼠移植后的变化和可能机制。结果表明该真皮支架植入创面后,可以缓解支架本身及其周围创面组织的炎症反应。