论文部分内容阅读
目的：
研究我国HBsAg阳性献血者感染的HBV病毒的基因型，亚型，血清型的分布及重要基因区域的突变特征；分析献血者中HBV基因型，亚型，血清型与献血者HBV血清学特征及病毒学特征的关系；研究HBsAg阴性HBVDNA检测阳性献血者感染的HBV病毒的基因型，亚型，血清型，分析其序列变异与HBsAg检测阴性的可能关系。
方法：
1．从2008-2010年五家合作血液中心（血站）（新疆乌鲁木齐血液中心，洛阳血站，绵阳血站，云南昆明血液中心，柳州血液中心）HBsAg确证阳性献血者标本中随机选取245份样本进行研究。
2．S区扩增测序结合多对型特异性引物巢式PCR法分析HBV基因型，通过S区序列推导HBV血清型，通过PreS/S区扩增测序或全基因组扩增测序分析HBV基因亚型。
3．扩增PreC/BCP区，用ClustalX将PreC/BCP区测序结果和PreS/S区扩增结果与标准株序列进行比对，分析是否存在PreS区和PreC/BCP区重要位点的突变；将测序结果翻译成氨基酸后与标准株的氨基酸序列比对，分析是否存在S区和逆转录酶(rt)编码区突变。
4．用SPSS11.0统计软件分析各地HBV血清型，基因型，基因亚型的分布，比较献血者中HBV基因型和亚型分布与慢性乙型肝炎患者的区别，分析HBV血清型，基因型，基因亚型与人口特征，病毒学特征和血清学特征的关系，比较PreS/S区和PreC/BCP区变异的地理分布，人口特征分布，基因型和亚型分布以及其与病毒学特征和血清学特征的关系。组间均数比较用独立样本t检验，率的比较用x2检验。
5．扩增8份HBsAg阴性HBVDNA检测阳性样本的HBVPreS/S区和PreC/BCP区，分析其基因型、亚型和血清型，分析成功测序样本的PreS区，S区和PreC/BCP区序列变异，分析其与HBsAg检测阴性的关系。
结果：
1．乌鲁木齐，洛阳，绵阳，昆明，柳州五地献血者感染的HBV病毒的主要基因型为B型和C型，B型流行率高于C型，未见E-H型；基因亚型依次为B2，C2，D1，A1;血清型依次为：adw，adr，ayw;在昆明献血者中发现了B基因型的一种新亚型B9;五地献血者感染的HBV中所有的A型和绝大多数B型为adw血清型，绝大多数C型为adr血清型。
2．C型和C2亚型中的HBeAg阳性率分别显著高于B型和B2亚型中的HBeAg阳性率。
3.17％的HBsAg阳性献血者样本中存在主要疏水区（majorhydrophilicregion，MHR）区突变，突变率低于其它国家报道的数据：献血者感染的HBV病毒B基因型中MHR区的突变率高于C基因型；PreS区发生缺失的较少，且所有的D基因型样本中均未发现D基因型特有的PreS区33个核苷酸的缺失；C型HBV中PreS区的突变率高于B型；五地献血者中PreC/BCP区变异样本的HBeAg阳性率显著低于无该区突变样本，C型中A1762T/G1764A朕合突变率高于B型，C2亚型高于B2亚型，G1896A突变在B型中发生率高于C型和D型，A型中未发现该位点突变；五地献血者中逆转录酶区突变位点主要与阿德福韦酯和拉米夫定耐药有关，未发现最典型的YMDD拉米夫定突变。
4．我国献血者中HBsAg-/HBVDNA+的献血者主要为隐匿性感染，小部分为窗口期感染；我国五地献血者HBV隐匿性感染基因型主要为C型；HBV隐匿性感染可能与PreS区缺失或插入及MHR区氨基酸突变有关，HBeAg检测阴性可能与PreC/BCP区核苷酸突变有关。
结论：
1．S区扩增测序结合多对型特异性引物巢式PCR法可以弥补单独测序法分型不能鉴别混合基因型感染的缺陷，是HBV分型的较好方法。
2．我国献血者中感染的HBV病毒的主要基因型为B型和C型，B型高于C型，且具有流行率增高的趋势，C型献血者中HBV复制活性高于B型。
3．献血者感染的C型HBV在PreS区的突变率和A1762T/G1764A联合突变率高于B型，B基因型中MHR区的突变率和G1896A突变率高于C基因型，A1762T/G1764A联合突变及G1896A突变与HBeAg检测阴性有关。
4．HBV隐匿性感染是威胁输血安全的的一个重要因素，隐匿性感染的产生可能与PreS区及MHR区突变有关。