【摘 要】
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兰科植物(Orchidaceae)是世界花卉市场上最流行的花卉品种之一。目前兰花新品种培育以传统的杂交育种为主，周期长。本文利用不同转基因方法对兰科植物进行转化，得到如下主要研
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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兰科植物(Orchidaceae)是世界花卉市场上最流行的花卉品种之一。目前兰花新品种培育以传统的杂交育种为主，周期长。本文利用不同转基因方法对兰科植物进行转化，得到如下主要研究结果:
1.在花粉管通道法转化蝴蝶兰的试验中发现:0.05％Silwet+5％蔗糖溶液是花粉管通道法转化蝴蝶兰较理想的注射液，授粉之后40-65d是进行注射的较理想时间。本实验得到的果实进行检验，种子GUS染色率为0.1％。
2.在农杆菌介导法转化金钗石斛原球茎的试验中发现:以金钗石斛播种28d形成的原球茎为转化的最佳受体，农杆菌培养过程中添加100μMAS，共培养天数为3d，农杆菌OD600为0.6，侵染液中AS浓度为200μM，侵染时间为20min为最佳条件，经GUS检测，GUS瞬时表达率可达7.4％。对转化的受体进行潮霉素抗性筛选，对获得的抗性组织GUS染色和特异片段PCR检测，也验证了外源基因已进入受体材料，并可以表达。
3.农杆菌子房注射法对金钗石斛的活体转化的实验中发现:在金钗石斛人工自花授粉后10d、20d、30d、40d、45d、50d、60d分别将工程化根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA1301)直接注射入子房内部。150d后，金钗石斛蒴果成熟，摘取果实，进行种子GUS染色、无菌播种、潮霉素筛选以及PCR检测实验。表明，子房注射对果实发育具有较大影响，在授粉后10-30d进行子房注射后，果实脱落;在授粉后45d进行子房注射，成熟果实的注射部位种子GUS染色率最高，可达18％;无菌播种之后，经潮霉素筛选，获得11株幼苗，每株植株均表现出GUS染色反应;随机挑选4株幼苗进行PCR检测，发现均能扩增出预期条带，说明外源基因已经整合到植株基因组内。农杆菌子房注射法在兰科植物转基因的成功应用，可以为兰科植物育种提供一种简单高效的方法。
4.综合比较三种转基因方法的优缺点:花粉管通道法操作比较简单，但是转化效率不高，影响转化效率的因素较多;农杆菌子房注射法，操作也较简单，转化效率较高;农杆菌介导转化原球茎法的转化效率较农杆菌子房注射法低，但是比花粉管通道法的转化效率要高，而且可以不受受体材料花期的影响，操作灵活性较大，但是后代是嵌合体的概率较高。综合考虑，农杆菌子房注射法和农杆菌介导法均可在兰花的育种中进行推广应用。
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