糖尿病患者外周血白细胞端粒长度与端粒酶活性变换的研究

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背景:糖尿病是一种以高血糖为病理特征的代谢性疾病,若体内长期维持高血糖状态会引起一系列的并发症,例如:肾脏、肝脏、心脏、血管、眼等的损伤,对人体健康产生非常严重的影响。糖尿病的发病率也呈逐年上升状态,并且,全球没有非常有效的医疗手段治愈此类疾病。糖尿病患病初始没有任何表征,当病人到医院就诊时,大部分胰岛细胞已经失去功能,只能依靠药物维持血糖平衡。糖尿病早期发现、早期治疗成为当今的一项研究热点,通过分子生物学手段对外周血白细胞端粒长度与端粒酶活性进行检测以探讨白细胞端粒长度变化、端粒酶活性变化与糖尿病的相关性。  方法:提取30例1型糖尿病(T1DM)、60例2型糖尿病(T2DM)、40例2型伴动脉硬化糖尿病(DAS)患者外周血白细胞基因组 DNA,利用实时荧光定量PCR的方法检测基因组DNA的端粒长度,以36B4基因作为对照,检测不同分型糖尿病间以及糖尿病患者与正常健康人间的端粒长度变化情况。从而探究糖尿病对人类外周血白细胞端粒长度的影响;利用多元线性回归分析探究影响端粒长度的具体因素。分别提取40例T1DM患者、80例T2DM患者的外周血白细胞与血浆,利用TRAP-PCR的方法检测白细胞与血浆中是否存在端粒酶活性;再利用荧光定量 PCR的方法检测端粒酶的活性;从而探究糖尿病对外周血白细胞、血浆的端粒酶活性影响情况,利用多元线性回归分析探究影响端粒酶活性的主要因素。  结果:建立了检测端粒长度与端粒酶活性的可靠办法。T1DM、T2DM、DAS患者外周血白细胞端粒长度均小于健康对照(NC)组;在不同分型的糖尿病对比中T1DM组端粒长度短于T2DM组与DAS组,DAS组比T2DM组更短。通过多元线性回归分析得到:在 T1DM组中,年龄与白细胞端粒长度呈负相关;T2DM组中,年龄、BMI与白细胞端粒长度呈负相关;DAS组中,BMI、患病时间与端粒长度呈负相关。在糖尿病患者外周血白细胞、血浆的端粒酶活性检测试验中,根据TRAP-PCR与RT-qPCR的结果显示,在T1DM组、T2DM组与NC组中的外周血血浆中并没有发现端粒酶活性。在外周血白细胞中均发现了端粒酶活性,T1DM患者的外周血白细胞端粒酶活性与T2DM患者均显著高于NC组的;并且T1DM患者的端粒酶活性高于T2DM患者。多元线性回归分析显示:在T2DM组中,性别与吸烟状况与白细胞端粒酶活性有显著相关性,得到男性与吸烟患者的白细胞端粒酶活性强于女性与不吸烟者。  结论:糖尿病患者的外周血白细胞端粒长度明显短于正常人,并且 T1DM患者的端粒长度显著短于 T2DM;在2型糖尿病的对比中,DAS患者的端粒长度明显短于 T2DM。患者的年龄、患病时间、BMI值与端粒长度的缩短有密切的关系。在T1DM与T2DM患者的外周血血浆中都没有发现端粒酶活性存在。T1DM与T2DM患者的外周血白细胞端粒酶活性显著高于正常人;并且,T1DM患者的白细胞端粒酶活性高于T2DM患者。在T2DM组中发现性别与吸烟状况与白细胞端粒酶活性有显著相关性。糖尿病对于外周血白细胞的端粒长度、端粒酶活性均有明显影响;对于二者的相关检查可能对于糖尿病的早发现、早治疗提供合理依据。
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