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胃溃疡是一种常见病、多发病,我国约有3.96%的成年人患胃溃疡,其中5%~10%可发生癌变。幽门螺旋杆菌感染、胃酸、胃蛋白酶对胃粘膜的侵袭是导致胃溃疡的主要原因,临床采用杀灭幽门螺旋杆菌、抑制胃酸分泌和胃粘膜保护等手段单独或联合应用相应的药物治疗胃溃疡,其中常用的有三联疗法(PPI+两种抗生素)或四联疗法(PPI+两种抗生素+胃粘膜保护剂)。胃是一个消化通道,不断蠕动将胃内容物向肠内输送,使药物难于在胃内滞留,导致治疗效果不理想,且易产生耐药性,造成胃溃疡难以根治。为了提高胃溃疡治疗效果,常通过增加给药剂量或给药次数来增加胃内的药物浓度,但这大大增加了药物毒副作用,导致因毒副作用放弃治疗。为此,人们发明了胃内漂浮制剂、生物粘附制剂等药物新剂型,以延长药物在胃内的滞留时间,提高治疗效果,但这些制剂没有靶向性,对胃溃疡治疗的贡献仍非常有限。因此,寻找可靶向作用于胃溃疡部位的物制剂对治疗胃溃疡具有十分重要的意义。硫糖铝是治疗胃溃疡的常用药物,在胃酸条件下,可解离出A13+和八硫蔗糖。八硫蔗糖带负电可与损伤粘膜渗出的带正电的蛋白结合,具有靶向结合到胃溃疡损伤粘膜的作用。因此,我们以硫糖铝为载体、替硝唑为工具药物,研究具有靶向作用于胃溃疡面的治疗药物制剂,以达到提高治疗效果、减少毒副作用的目的。第一部分:硫糖铝粘附性质评价方法(1)采用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-AES)建立了硫糖铝中A13+含量测定方法,确定了A13+检测波长396.153nm,标准曲线方程:C=0.0017A-0.5665,R2=1.0000,浓度测定范围(0.10～50.01μg/mL)。该方法操作简单、检测限低、重现性好,可用于硫糖铝及其生物样品中Al3+的含量测定。(2)采用蒽酮试液显色紫外-可见光分光光度法建立了硫糖铝中八硫蔗糖含量测定方法,确定了蒽酮试液显色的八硫蔗糖检测波长618nm,标准曲线方程:A=0.139C+0.0174,R2=0.9987,浓度测定范围(0.010～3.150mg/mL)。该法操作简单、重现性和稳定性好,可用于硫糖铝及其生物样品中八硫蔗糖含量测定。(3)设计、制备了自制分离力测定装置,确定了分离力测定条件:硫糖铝20.0mg均匀撒于胃粘膜表面,0.1mol/L HCl溶液润湿,置RH92.5%密闭容器中20min、施压100g、施压15min、加水速率10mL/min。采用该装置和测定条件,测定硫糖铝与胃粘膜的分离力可获得良好的重现性。(4)设计了组织残留量测定方法,确定了组织残留量测定条件:硫糖铝20.0mg均匀撒于胃粘膜表面,0.1mol/L HCl溶液润湿,置RH 92.5%密闭容器中20min,5rpm振荡速率。采用该测定方法和条件,测定硫糖铝在胃粘膜的组织残留量可获得良好的重现性。第二部分:硫糖铝选择性粘附性质的影响因素(1)采用无水乙醇灌胃制造大鼠胃溃疡模型,方法简单、重现性好,可制得溃疡指数为56±12的胃溃疡模型大鼠。(2)采用自制分离力测定装置,测得硫糖铝对正常胃粘膜的分离力(Fn)为8.8 g/cm2,对胃溃疡粘膜的分离力(Fm)为30.2 g/cm2,其Fm/Fn为3.43。(3)采用自己设计的组织残留量测定方法,测得硫糖铝中Al3+在正常胃粘膜和胃溃疡粘膜组织残留量无差异;测得硫糖铝中八硫蔗糖在正常胃粘膜和胃溃疡粘膜组织残留量有明显差异,其差异与环境pH有关,即硫糖铝在pH1.0-pH3.0时的组织残留量差异大,pH4.0时残留量有差异,pH≥5.0时组织残留量无差异。表明硫糖铝中Al3+在正常胃粘膜和胃溃疡粘膜无组织选择性,pH≤4.0时硫糖铝中八硫蔗糖在正常胃粘膜和胃溃疡粘膜有组织选择性,pH≥5.0无组织选择性。(4)粘附辅料(HPMC、Carbopol、壳聚糖)和酸性辅料(苹果酸、马来酸、柠檬酸)可增加硫糖铝在正常和溃疡胃粘膜的粘附能力,但不增加对胃溃疡粘膜的选择性;粘附辅料增加粘附力大小为HPMC>壳聚糖>Carbopol,酸性辅料增加粘附力大小为柠檬酸≈马来酸>苹果酸。硫酸软骨素可增加硫糖铝的粘附能力和对胃溃疡粘膜的选择性。第三部分:胃溃疡选择性粘附制剂的制备及体外评价(1)建立了替硝唑在胃溃疡选择性粘附制剂中的UV含量测定方法,确定了检测波长277nm,标准曲线方程:A=0.0249C-0.0129,R2=0.9998,浓度测定范围(10.03-150.50μg/mL),日内、日间精密度和回收率符合方法学要求,表明该方法适用于替硝唑在胃溃疡选择性粘附制剂中的含量测定。(2)采用L9(34)正交实验,筛选出替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂的优化处方:A2B3C1D2,即硫糖铝8g、替硝唑2g、HPMC6g、CS5g、柠檬酸0.5g、10%PVP乙醇溶液作粘合剂。(3)采用转篮法考察了HPMC、硫酸软骨素、柠檬酸、PVP对自制制剂中替硝唑释放度的影响。结果表明, PVP、HPMC可阻滞药物释放;硫酸软骨素、柠檬酸可促进药物的释放。(4)采用自制分离力测定装置考察了HPMC、硫酸软骨素、柠檬酸、PVP对自制制剂分离力的影响。结果表明,HPMC、硫酸软骨素、柠檬酸可增加分离力,增加大小次序为硫酸软骨素> HPMC >柠檬酸,而PVP则减小分离力。(5)采用残留量测定法和UV含量测定方法,考察了HPMC、硫酸软骨素、柠檬酸、PVP对自制制剂中替硝唑组织残留量的影响。结果表明,HPMC、硫酸软骨素、柠檬酸、PVP均可增加替硝唑的组织残留量,但在正常胃粘膜与溃疡胃粘膜增加量不同,对正常胃粘膜的组织残留量增加次序为硫酸软骨素>HPMC>柠檬酸>PVP;对溃疡胃粘膜增加次序为硫酸软骨素>>柠檬酸>PVP>HPMC。(6)替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂的优化处方验证表明,其三批的t1/2为2.82-2.99h,含量99.64%-100.07%,溃疡胃分离力/正常胃分离力为3.17-3.26,溃疡胃组织残留量/正常胃组织残留量为2.96-3.08。表明替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂的优化处获得的制剂质量稳定。第四部分:胃溃疡选择性粘附制剂的体内初步研究(1)以甲硝唑为内标,建立了HPLC测定大鼠胃内替硝唑残留量的体内含量测定方法。替硝唑与甲硝唑峰面积之比(Y)和替硝唑浓度(X)的标准曲线方程:Y=0.0911X-0.0389,R2=0.9998,替硝唑浓度测定范围(0.504μg/mL-75.018μg/mL),最低检测浓度0.08μg/mL。该方法分离度好、检出限低,精密度、回收率符合生物样品分析要求,适用于替硝唑的胃内含量测定。(2)体内残留量实验表明,替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂在正常大鼠胃内1h药物残留量38.42%,2h药物残留量21.12%;溃疡大鼠胃内1h药物残留量63.81%,4h药物残留量30.26%,12h残留量10.51%。市售替硝唑胶囊在正常胃和溃疡胃的药物残留量差异不大,给药1h正常胃残留28.36%,2h残留13.05%;溃疡胃给药1h正常胃残留30.51%,2h残留14.18%。说明替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂可药物在胃内的滞留时间,并对胃溃疡有选择性。本课题以硫糖铝为载体、替硝唑为主药,设计了替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂,建立了电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-AES)测定硫糖铝中A13+含量方法;建立了蒽酮试液显色紫外分光光度法测定硫糖铝中八硫蔗糖含量方法;设计、制备了自制分离力测定装置,确定了分离力测定条件;设计了自制组织残留量测定方法,确定了组织残留量测定条件;建立了替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂中替硝唑体外UV含量测定方法、体内HPLC含量测定方法。证实了硫糖铝对胃溃疡的选择性与润湿介质pH、粘附辅料、酸性辅料有关,通过正交试验筛选出了替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂优化处方,证实替硝唑胃溃疡选择性粘附制剂可延长药物在胃内的滞留时间,并对胃溃疡有选择粘附作用,达到了设计的预期目标。本研究课题目前尚未见相关报道。