【摘 要】
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人载脂蛋白Al米兰突变体(apolipoproteinA I—milano,AIM)是ApoAI的天然突变体，首次发现于意大利米兰地区一个村庄的部分居民中，其血浆中ApoA I的第173位Arg突变成Cys。携带AIM
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人载脂蛋白Al米兰突变体(apolipoproteinA I—milano,AIM)是ApoAI的天然突变体，首次发现于意大利米兰地区一个村庄的部分居民中，其血浆中ApoA I的第173位Arg突变成Cys。携带AIM的人群其心血管类疾病的发病率大大低于正常人群。研究表明，AIM具有比ApoAI更强的抗动脉粥样硬化症的作用。因此AIM有可能成为一种新型的治疗和预防动脉粥样硬化症等疾病的药物，具有临床应用前景。
毕赤酵母系统已经普遍用于外源蛋白的表达。用毕赤酵母表达系统分泌表达rAIM，有利于rAIM的大规模生产。将pPIC9k-apoAI质粒上的apoAI cDNA的第173位Arg密码予突变成Cys密码子，得到重组质粒pPIC9k-apoAI-milano，用Bg/II线性化，电转化Pichia pastoris GS115菌株，筛选获得G418高抗性转化子，转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导，上清液用SDS-PAGE与Western blotting检测，有明显rAIM表达，但是其C末端发生部分降解。我们尝试对酵母工程菌株Amp13发酵条件的优化，在摇瓶培养时，将BMMY培养基的pH值调节到7.0，蛋白胨用量增加到4％，添加0.1％Arg、0.1％Ala和5mmol/L的EDTA，将诱导温度降低至25℃，诱导时间为3天时，使rAIM的降解得到有效控制，其表达水平达到约70mg/L发酵液，其中全长的rAIM所占的比例达到约80％。我们还采用冷丙酮沉淀法初步纯化了酵母工程菌发酵液中的rAIM，并证明rAIM含有巯基，具有磷脂结合能力。
我们用毕赤酵母系统成功表达rAIM，并且初步解决了分泌表达蛋白降解的问题，为今后运用基因工程大量生产rAIM奠定了基础，并为进一步研究rAIM的结构和生物学功能以及临床应用创造了条件。
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