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深静脉血栓（deep vein thrombosis，DVT）是一种临床常见病、多发病，并认为是肿瘤、肾衰等许多疾病的严重并发症，常导致很高的致残率和死亡率，严重威胁现代社会人类健康和生活质量，因此加强DVT的防治具有重要意义。目前有关其病理形成机制尚未完全明了，临床尚缺乏安全有效的药物。已有研究表明，血流瘀滞状态、静脉壁损伤和高凝状态是静脉血栓形成的三大因素，并与炎症反应密切关联，其中内皮细胞起重要调节作用，血流瘀滞时，内皮因缺氧而发生活化或损伤，大量表达TF，启动凝血级联反应，促进血栓形成，同时血栓调节蛋白受抑，血管通透性增高，大量表达P-selectin，E-selectin、VCAM-1及ICAM-1等粘附分子，促进白细胞粘附和迁移，加重内皮细胞损伤。因此调节内皮功能，抑制白细胞活化迁移，减轻炎症反应，改善凝血平衡，有利于静脉血栓的防治。麦冬作为一种常用滋阴中药，临床广泛应用于炎症性和心血管疾病的治疗，麦冬及其作为主药的滋阴方剂对内皮功能亦有明显保护作用，但其抗炎、抗血栓活性及其作用机制尚未有效阐明，活性相关的物质基础也不十分清楚。本文结合静脉血栓形成的炎性机制，拟从以下几方面对麦冬抗炎、抗血栓栓活性及其作用机制进行研究：（1）麦冬提取物抗炎活性的证实，（2）麦冬提取物抗血栓活性的证实；（3）麦冬提取物有效成分的寻找与活性确证；（4）白细胞、内皮细胞活化参与静脉血栓形成中指征确定，及麦冬主要有效成分的调控作用，以期为阐明麦冬的传统功效及其临床应用于炎症性和血栓疾病提供药理学依据，为抗静脉血栓药物研制提供可能的新靶点和先导化合物，同时为丰富中医“滋阴”理论的内涵提供相关科学数据。
本研究在第一章中，首先应用多种小鼠、大鼠动物模型，考察麦冬提取物整体给药的抗炎活性。结果显示麦冬提取物可剂量依赖性地抑制二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀，可明显抑制注射角叉菜胶所致的小鼠足跖肿胀，对角叉菜胶诱导的大鼠急性胸膜炎模型和酵母多糖引起的小鼠腹膜炎模型的白细胞游走均有明显抑制作用，但不影响角叉菜胶模型胸腔渗出液中升高的前列腺素E<,2>（PGE<,2>）的含量，首次证实麦冬提取物整体给药具有显著抗炎活性，其作用可能与抑制炎症介质的产生或释放从而降低血管通透性以及影响粘附分子表达等环节抑制白细胞游走等有关。鉴于白细胞粘附于内皮细胞是炎症时白细胞游走过程的首要步骤和关键环节，在注射角叉菜胶和酵母多糖的动物模型中，有肿瘤坏死因子（TNF-α）和蛋白激酶C（PKC）途径的参与，我们采用rh TNF-α和PKC活化剂佛波酯（PMA）诱导的人脐带静脉内皮细胞株ECV-304细胞与人原髓性白血病细胞株HL-60细胞之间相互作用模型，考察麦冬提取物的体外抗粘附活性，结果显示麦冬提取物对两种模型均呈现明显抑制作用，通过对细胞活力的测定，证实其抗粘附活性与细胞毒作用无关，同时对正常内皮细胞与白细胞粘附无明显影响。麦冬提取物抑制TNF-α诱导粘附的IC<,50>值明显低于抑制PMA诱导粘附IC<,50>值，提示可通过抑制包括PKC在内的多种途径发挥抗粘附作用。上述结果从整体与细胞水平证实麦冬提取物具有明显抗炎活性，为其临床应用于炎症性疾病提供药理学依据。
大量研究证明，白细胞与内皮细胞粘附作用参与了包括炎症、血栓、肿瘤在内的多种病理过程的发生发展，麦冬提取物具有明显抗细胞粘附活性，它是否也有抗血栓作用呢？第二章的结果显示，麦冬提取物可明显缩短注射角叉菜胶后48h-72h出现的小鼠尾血栓长度，减轻大鼠动静脉旁路丝线法诱导动静脉混合性血栓重量，对结扎下腔静脉6h和24h所形成的小鼠、大鼠静脉血栓重量均有明显减轻作用，证实麦冬提取物具有显著抗血栓活性，为临床用于血栓性疾病的防治提供有力实验依据。同时，与华法令（warfarin）不同，它不影响血浆活化的部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）及凝血酶时间（TT）等凝血相关指标，提示其可能造成出血的不良反应小。采用光学显微镜镜和扫描电镜技术对血栓形成部位进行病理组织学检查，结果显示模型大鼠静脉血栓形成部位血管内皮严重损伤，白细胞大量粘附浸润，预先给予麦冬提取物后，血管内皮损伤明显减轻，粘附或迁移的白细胞数显著减少。同时，体外采用低亚硫酸钠（Na<,2>S<,2>O<,4>）所致的ECV304细胞缺氧损伤模型，从形态学观察和细胞活力测定两方面，证实麦冬提取物体外加药有直接的内皮保护作用。进一步提示麦冬提取物可能通过保护内皮细胞、抑制白细胞粘附，从而抑制静脉血栓形成。 上述研究表明，麦冬提取物在类似剂量范围内呈现出明显抗炎与抗血栓活性，那么它共同的物质基础和可能的作用机制是什么呢？已有研究证实麦冬皂苷类成分具有广泛防治心血管疾病活性，相关单体皂苷短葶山麦冬皂苷C有抗炎、抗肿瘤活性，本研究所用麦冬提取物富含59％皂苷成分，已被研制成抗心律失常原中药二类新药，麦冬皂苷D（ophiopogonin D）是其中含量最高的皂苷类成分，为其质量标准需检测的指标成分，也常用以作为评价麦冬类药材及其复方制剂质量的标准之一，而其药理活性则鲜见报道，因此在第三章中，我们着重考察了ophiopogonin D及其苷元ruscogenin的活性。首先采用已经建立的TNF-α及PMA诱导的ECV304细胞与HL-60细胞粘附模型，考察这两个单体成分的体外抗炎活性，结果发现ophiopogonin D和ruscogenin均明显抑制上述因素诱导的粘附，提示它们可能通过影响PKC通路发挥作用；ophiopogonin D的IC<,50>明显低于ruscogenin，提示ruscogenin苷元是麦冬提取物发挥抗粘附作用的重要结构母体，其1位上的糖链有一定促进其活性的作用。进而采用酵母多糖A诱导的小鼠腹腔白细胞游走模型，验证二者体内给药是否具有抗炎活性，结果发现，ophiopogonin D 1 mg／kg及ruscogenin5 mg／kg均可显著降低腹腔液升高的白细胞总数和中性粒细胞数，证实其体内给药的抗炎活性。那它们是否也同时具有抗血栓活性呢？结果首次证实两种单体成分皆剂量依赖性地抑制下腔静脉结扎诱导小鼠静脉血栓形成，其强度与阳性药wafarin相当，表明二者亦是麦冬提取物的两个抗静脉血栓形成的活性成分（相关内容已申请发明专利，并已公开），提示ophiopogonin D及mscogenin为麦冬提取物发挥抗炎抗血栓活性共同的物质基础，为麦冬类药材的质量评价提供了药理学依据，也证实皂苷类成分是麦冬重要的活性物质。
麦冬提取物及其两个单体成分均具有明显的抗炎、抗血栓活性，那么其可能的机制是什么呢？考虑到在酵母多糖A和角叉菜胶诱导的炎症模型中都有环加酶2（COX-2）的参与，它与血栓形成也有密切关系，我们首先考察了麦冬提取物及其单体成分对PMA诱导的COX-2 mRNA表达水平的影响，结果发现在所采用的浓度范围内，均COX-2mRNA表达无明显影响，这可能也是麦冬提取物不影响PGE<,2>含量的原因之一。鉴于粘附分子在内皮细胞与白细胞粘附中起重要作用，我们继而采用RT-PCR和流式细胞仪测定的方法，重点考察麦冬主要的活性成分ophiopogonin D对TNF-α活化的内皮细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响，结果发现ophiopogonin D 10μM可明显抑制ICAM-1的mRNA和蛋白水平的表达，提示它具有抑制粘附分子表达的作用，这可能是麦冬发挥抗炎作用的机制之一。
为进一步探讨ophiopogonin D抗炎、抗血栓活性及其作用机制，在第四章中，我们首先观察了大鼠下腔静脉结扎模型白细胞数量、粘附功能、炎性因子、粘附分子分泌的时程变化，为证实炎症参与血栓形成过程提供更多的相关指征，结果发现，术后6 h外周血中白细胞总数有所增加，随后逐渐下降，但无明显差别；模型组术后24 h中性粒细胞数目明显下降，术后72 h、144 h单核细胞、淋巴细胞数目显著降低，表明在早期主要是中性粒细胞粘附迁移于血栓形成部位，中、晚期则以单核细胞和淋巴细胞为主，提示外周血白细胞分类计数可作为诊断血栓进程的一种辅助指标。另外发现，术后6 h模型组外周血硝基蓝四氮唑（NBT）还原率显著高于假手术组，同时外周血中性粒细胞与内皮细胞的体外粘附功能增强，术后24 h模型组血栓形成最明显，进一步证实早期中性粒细胞的活化粘附参与或促进血栓的形成。血清中炎症因子等测定结果显示，IL-1及sICAM-1在结扎后72 h明显升高：TNF-α，结扎后144 h明显升高，提示血栓的形成可能加速炎症因子释放，调节血清IL-1及sICAM-1、TNF-α含量，可作为评价抗血栓药物活性的指标之一。