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糖尿病是以持续高血糖为基本生化特征的一种慢性全身代谢性疾病,主要由胰岛素分泌绝或相对不足引发的糖、蛋白质、脂肪代谢紊乱综合病症。随着人们生活水平的提高,近年来糖尿病发病率呈现逐年上升趋势。因此,寻找更好的糖尿病治疗药物、给药途径和治疗方法是学术界亟待解决的重要课题。
胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)是由肠道L细胞合成和分泌的由30个氨基酸组成的多肽。GLP-1具有促进葡萄糖依赖性胰岛素分泌、减少食物摄取、减慢胃排空,以及抑制胰高血糖素分泌、刺激胰β细胞增殖、促进胰岛再生、抑制胰β细胞的凋亡等特殊功能。
葡萄糖依赖性促胰岛素(GIP)是由肠道K细胞合成和分泌的由42个氨基酸组成的多肽。具有促进第一时相胰岛素的分泌,改善胰岛素敏感性,刺激胰β细胞再生,延缓胰岛素清除等作用,对2型糖尿病具有良好的治疗效果。
基于GLP-1及GIP在糖尿病治疗中的作用及各自的优势,本研究利用重组PCR的方法获得重组口服长效GLP-1(rolGLP-1)和GIP(rolGIP)融合基因(rolGG),并构建了表达载体pET-22b(+)-rolGG,将其转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3),以获得功能互补型双元促胰岛素rolGG,用于2型糖尿病小鼠药效学初步研究。将获得的工程菌株进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Westernblotting检测结果表明rolGG得到正确表达。对其诱导表达条件进行优化,结果表明在25℃下诱导12h,目的蛋白rolGG的表达量最高,占可溶性总蛋白的15%,产量达到330mg/L,为利用重组rolGG防治2型糖尿病奠定了良好的前期基础。
将诱导表达后的大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)/rolGG细胞裂解上清液进行浓缩、纯化,获得了大量的rolGG样品,然后将其灌服高血糖C57/BL小鼠,结果发现rolGG处理组血糖显著降低,体重增加趋于正常,有效改善了糖尿病小鼠的饮食、饮水平衡。
本研究为功能互补型双元促胰岛素rolGG口服蛋白类药物的研发提供了较完善的实验和理论依据,并为利用重组rolGG口服防治2型糖尿病临床研究和应用奠定了基础。
本研究较为系统地疗效学研究结果证明,ro1GG具有良好的临床应用前景,其临床应用可能给广大糖尿病患者带来战胜糖尿病的希望。