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研究背景与目的:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,目前国内外已有多项研究证实胃癌的发生与幽门螺杆菌(Helicobaeter pylori,H.pylori)有着密切的关系。本课题组通过前期研究发现正常胃粘膜上皮细胞株GES-1与胃癌组织来源的H.pylori共培养后可发生TRAF1基因上调的现象,并且在胃癌前病变及胃癌组织中有TRAF1表达增高的现象。而目前通过研究已经发现TRAF1与多种肿瘤的发生与发展有相关关系。所以本课题拟建立TRAF1基因干扰的瞬时转染的胃癌细胞模型来明确TRAF1在胃癌,特别是H.pylori相关的胃癌的发生和发展究竟存在怎样的相关性。方法:首先我们通过Real-time PCR和Western-blot两种方法来验证TRAF1在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌细胞株的表达情况,并从中筛选TRAF1表达最高的一株细胞进行后期实验。我们根据参考文献构建3个TRAF1shRNA表达载体pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA1-3,然后用Lipofectamine2000脂质体将其分别转染至目标胃癌细胞株中,再应用Real-time PCR和Western-blot来检测转染前后细胞中TRAF1基因在mRNA和蛋白水平的表达变化,以此来验证干扰的效果,并且筛选出干扰效率最强的TRAF1shRNA来进行后续的实验。经检测确定TRAF1被成功干扰后,我们可通过MTT法、流式细胞技术检测TRAF1对胃癌细胞增殖活力和凋亡的影响,通过Transwell迁移实验来检测TRAF1对胃癌细胞迁移能力的影响。结果:1.在BGC823、SGC7901、MGC803三株胃癌细胞株中,TRAF1的表达较正常胃上皮细胞系GES-1均有上调,其中在BGC823细胞株中表达最高。2.根据参考文献选取的3个TRAF1shRNA对TRAF1基因均有干扰作用,其中以pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA2干扰效果最强。3.干扰胃癌细胞BGC823中的TRAF1可使细胞生长活力减弱,凋亡明显增加。4.干扰胃癌细胞BGC823中的TRAF1对细胞的迁移功能无显著影响。结论:在BGC823, SGC7901, MGC803三株胃癌细胞株中,TRAF1基因的表达均有上调的现象,并且以BGC823上调最明显。通过体外干扰胃癌细胞株BGC823,我们可以发现TRAF1可抑制BGC823细胞的凋亡。这些研究提示TRAF1在胃癌的发展过程中有可能发挥着抗凋亡的功能。这个结果可能为阐明胃癌特别是H.pylori相关的胃癌发生的分子机制提供一定的理论依据。