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目的通过构建2型糖尿病(T2DM)动物模型及高糖刺激体外培养足细胞,测定T2DM大鼠模型肾组织、体外培养足细胞中microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)、nephrin、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)及凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和bax/bcl-2的表达水平和足细胞凋亡情况,并应用miR-26a-5p mimics、inhibitor转染高糖刺激体外培养的足细胞,观察上述指标的变化,探讨miR-26a-5p对TRPC6介导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)足细胞损伤的作用及其可能机制,为DN足细胞的保护提供新的临床思路和治疗靶点。方法体内实验选取30只SPF级、雄性Wistar大鼠,随机分为两组,其中20只用于构建T2DM大鼠模型,具体方法为采用高糖高脂喂养并联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,30 mg/kg),另设正常对照组(NC组)10只。对于建模达到要求的大鼠留取血、尿及肾脏标本,测定两组大鼠24小时尿白蛋白排泄率(UAE)、尿肌酐(Ucr)、内生肌酐清除率(CCr)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血肌酐(Scr)等指标;光镜、电镜观察肾脏病理及足细胞结构改变,采用免疫组织化学方法观察nephrin、TRPC6分布情况;Western blot法测定nephrin、TRPC6、凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和bax/bcl-2的蛋白表达;qRT-PCR测定nephrin、TRPC6、cleaved-caspase-3和bax/bcl-2 mRNA及miR-26a-5p的表达,肾组织足细胞凋亡情况采用TUNEL法检测。体外实验将永生化小鼠足细胞(MPC5)分为高糖组(HG组)、正常糖对照组(NG组)和渗透压处理组(HM组),并对高糖组足细胞应用miR-26a-5p mimics、inhibitor进行体外转染,采用Western blot和qRT-PCR分别测定转染前后nephrin、TRPC6、cleaved-caspase-3和bax/bcl-2蛋白及mRNA的表达水平,流式细胞技术检测足细胞凋亡率。结果1.与NC组相比,T2DM大鼠KW/BM、24h UAE、CCr、FBG、LDL等各生化指标明显升高(均P<0.05),HDL明显下降(P<0.05),伴有明显的胰岛素抵抗;2.光镜下T2DM大鼠肾小球体积肥大,系膜细胞及基质增生,电镜可见基底膜增厚,足突紊乱,融合率明显增加(P<0.05);3.免疫组化结果显示,较NC组大鼠相比,T2DM大鼠肾组织中TRPC6表达明显增加,而nephrin表达明显减低(二者均P<0.05);4.qRT-PCR及Western blot结果显示,DM大鼠肾组织及HG组足细胞中miR-26a-5p、nephrin、bcl-2 m RNA及蛋白表达显著减少(P<0.05),TRPC6、cleaved-caspase-3、bax mRNA及蛋白表达显著增多,TUNEL法及流式细胞术显示高糖条件刺激下足细胞凋亡明显增加(P<0.05);5.体外足细胞经miR-26a-5p mimics转染后nephrin表达较前恢复,TRPC6、cleaved-caspase-3和bax/bcl-2表达较前减少,细胞凋亡明显降低(均P<0.05);而经miR-26a-5p inhibitor转染后,nephrin表达下降,TRPC6、cleaved-caspase-3和bax/bcl-2表达明显增加(均P<0.05)。结论1.高糖刺激可引起足细胞mi R-26a-5p表达明显减少,TRPC6、足细胞凋亡明显增加,特异性增加miR-26a-5p的表达可明显缓解上述改变,抑制miR-26a-5p表达可加重足细胞损伤;2.miR-26a-5p可以通过降低TRPC6表达减少DN足细胞凋亡。