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肠球菌(Enterococcus)是人类和动物肠道的正常菌群,为一种重要的机会致病菌。正常肠道肠球菌一直以来作为微生态制剂使用,用于稳定和调节肠道菌群。近年来,由于抗生素的滥用,使得肠球菌的感染不断上升,成为医院内感染的主要致病菌。肠球菌溶血素(cytolysin/hemolysin)是肠球菌的一个重要毒力因子,可以溶解红细胞,杀死白细胞及毒害心脏的作用。肠球菌溶血素的产生条件及其生物学特性是研究肠球菌致病性的一个重要环节。本试验,首先分析了11株临床分离株肠球菌的溶血性,并与30株健康羊分离株、1株标准G群链球菌(C55950-G)和1株标准肠球菌(F6-1.0130)进行溶血性比较。以平板法(Plate Assay,PA)、接触法(Contact Hemolysis,CH)、上清法(Supernatant Assay,SA)、培养法(Culture Hemolysis,CLH)和3种SA改进法检测上述菌对兔血和羊血的溶血性。结果表明,11株临床分离株在PA法和CLH法中有7株对兔血有溶血性,其余4株不溶;CH法、SA法和3种SA改进法测得11株均不溶血。但在羊血平板上溶血性较弱,仅有4株α溶血。C55950-G在所有检测方法均为溶血性。F6-1.0130对羊血平板有α溶血,而对兔血没有溶血性。11株临床分离株中有3株与标准肠球菌溶血性一致。30株健康羊分离株溶血性不稳定,初次分离培养有16株β溶血,但多次传代后,只有2株仍有溶血能力。因此,不同羊源肠球菌分离株的溶血性不一致,并且对羊血和兔血的溶血能力也有很大差别。肠球菌在3种SA改进法中均不能溶兔血。推测羊源肠球菌溶血素必须在红细胞诱导下才能产生,并且为细胞结合型。选择一株溶血性较强的肠球菌E129-3株,利用CLH法检测不同培养条件对其溶血素的影响。结果表明,种子液以2%接种THB,在pH8.5,40℃静置培养12-24h的条件下溶血能力较好。小白鼠、兔、狗红细胞对该溶血素最敏感;牛红细胞对该溶血素不敏感。该溶血素可以被二硫苏糖醇(DTT)、Ca2+活化,被蛋白酶K、EDTA、Zn2+、Cu2+抑制。利用光学显微镜,电子显微镜观察E129-3菌株对兔红细胞的作用,在培养后2h细胞浆内着色不一致或电子云密度降低,5h红细胞数量明显减少。通过E129-3株培养产物的SDS-PAGE图谱分析,肠球菌E129-3株与F6-1.0130蛋白表达谱不一致,且E129-3株在无血诱导时蛋白表达极低,种类少;但有血存在时,蛋白表达量增加,种类增多。提示肠球菌中存在大量沉默基因,在诱导物存在时沉默基因可被诱导表达。