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目的: 观察温和灸天枢穴对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠结肠损伤的修复作用;探讨温和灸对UC大鼠腹腔Mψ功能表型的表达及吞噬的调节作用,并分析温和灸对腹腔灌洗液中Mψ分化关键细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13)、Mψ移动抑制因子(MIF)含量及结肠组织中MIF表达的作用,从Mψ活性调节角度阐释艾灸治疗UC、改善结肠损伤的作用机制。 方法: 清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、高温艾灸组、低温艾灸组。除正常组外,其余大鼠予3.5% DSS溶液自由饮用制备UC模型。模型验证制备成功后,高温艾灸组、低温艾灸组大鼠给予双侧天枢穴温和灸治疗,温度分别控制在(43±1)℃和(36±1)℃,10min/次,1次/天,共灸治8天。治疗结束后,应用苏木素-伊红染色法观察大鼠结肠组织病理学变化,采用流式细胞术检测大鼠腹腔内不同功能表型Mψ数量及吞噬活性,运用荧光定量聚合酶链式反应法测定腹腔Mψ中iNOs、ArgⅠ mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定法检测腹腔微环境中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13和MIF的蛋白含量,应用免疫组织化学法观察结肠组织中MIF的表达。 结果: (1)大鼠结肠形态学及损伤评分:与正常组比较,模型组大鼠大体损伤评分和病理损伤评分均显著升高(P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠结肠大体损伤评分降低(P<0.01,P<0.05);病理损伤评分均降低(均P<0.01)。 (2)腹腔冲洗液中CD11b+CD86+Mψ和CD11b+CD163+Mψ数量变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ数量明显增加,CD11b+CD163+Mψ数量减少,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ降低,CD11b+CD163+Mψ数量上升,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。低温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ数量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ降低,CD11b+CD163+Mψ数量上升,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。 (3)腹腔Mψ中ArgⅠ、iNOs mRNA表达变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达下调,iNOs mRNA表达上调,差异具有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达升高,iNOs mRNA表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。 (4)腹腔冲洗液中Mψ吞噬荧光微球活性观察:与正常组比较,模型组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力明显增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,低温艾灸组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力无显著性变化(P>0.05)。 (5)腹腔冲洗液中细胞因子含量的变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α、IFN-γ含量显著增加(均P<0.01),IL-4、IL-13含量减少(均P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α含量降低(P<0.01,P<0.05);IL-4、IL-13含量升高(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔冲洗液中IFN-γ含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);低温艾灸组与模型组相比,TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-13含量变化不显著(均P>0.05)。 (6)结肠组织、腹腔冲洗液中MIF蛋白表达的变化:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织中MIF蛋白表达减少,腹腔冲洗液中MIF蛋白含量明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠结肠组织中MIF蛋白表达增加,腹腔冲洗液中MIF含量减少,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。 结论: 1.(43±1)℃温和灸天枢穴能促进UC大鼠结肠损伤修复。 2.(43±1)℃温和灸能调节UC大鼠腹腔冲洗液中Mψ吞噬活性。 3.(43±1)℃温和灸能影响UC大鼠腹腔Mψ的功能表型变化,表现为促进Mψ表面CD163表达、上调细胞内ArgⅠ mRNA表达,抑制Mψ表面CD86表达、下调细胞内iNOs mRNA表达。 4.(43±1)℃温和灸可能通过降低UC大鼠腹腔微环境中TNF-α、IFN-γ含量,增加IL-4、IL-13含量,调节腹腔Mψ的分化和吞噬活性。 5.(43±1)℃温和灸能下调腹腔冲洗液中MIF蛋白含量,促进结肠局部MIF蛋白表达。 6.温和灸(43±1)℃温热刺激天枢穴调节UC大鼠Mψ功能表型、吞噬活性及趋化可能是艾灸治疗UC的重要机制。