温和灸天枢穴对溃疡性结肠炎大鼠腹腔巨噬细胞及其移动抑制因子调节作用的研究

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目的:  观察温和灸天枢穴对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠结肠损伤的修复作用;探讨温和灸对UC大鼠腹腔Mψ功能表型的表达及吞噬的调节作用,并分析温和灸对腹腔灌洗液中Mψ分化关键细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13)、Mψ移动抑制因子(MIF)含量及结肠组织中MIF表达的作用,从Mψ活性调节角度阐释艾灸治疗UC、改善结肠损伤的作用机制。  方法:  清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、高温艾灸组、低温艾灸组。除正常组外,其余大鼠予3.5% DSS溶液自由饮用制备UC模型。模型验证制备成功后,高温艾灸组、低温艾灸组大鼠给予双侧天枢穴温和灸治疗,温度分别控制在(43±1)℃和(36±1)℃,10min/次,1次/天,共灸治8天。治疗结束后,应用苏木素-伊红染色法观察大鼠结肠组织病理学变化,采用流式细胞术检测大鼠腹腔内不同功能表型Mψ数量及吞噬活性,运用荧光定量聚合酶链式反应法测定腹腔Mψ中iNOs、ArgⅠ mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定法检测腹腔微环境中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13和MIF的蛋白含量,应用免疫组织化学法观察结肠组织中MIF的表达。  结果:  (1)大鼠结肠形态学及损伤评分:与正常组比较,模型组大鼠大体损伤评分和病理损伤评分均显著升高(P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠结肠大体损伤评分降低(P<0.01,P<0.05);病理损伤评分均降低(均P<0.01)。  (2)腹腔冲洗液中CD11b+CD86+Mψ和CD11b+CD163+Mψ数量变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ数量明显增加,CD11b+CD163+Mψ数量减少,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ降低,CD11b+CD163+Mψ数量上升,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。低温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ数量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内CD11b+CD86+Mψ降低,CD11b+CD163+Mψ数量上升,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。  (3)腹腔Mψ中ArgⅠ、iNOs mRNA表达变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达下调,iNOs mRNA表达上调,差异具有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达升高,iNOs mRNA表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔Mψ中ArgⅠ mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。  (4)腹腔冲洗液中Mψ吞噬荧光微球活性观察:与正常组比较,模型组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力明显增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,低温艾灸组大鼠腹腔内Mψ吞噬荧光微球能力无显著性变化(P>0.05)。  (5)腹腔冲洗液中细胞因子含量的变化:与正常组比较,模型组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α、IFN-γ含量显著增加(均P<0.01),IL-4、IL-13含量减少(均P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α含量降低(P<0.01,P<0.05);IL-4、IL-13含量升高(均P<0.01)。与模型组比较,高温艾灸组大鼠腹腔冲洗液中IFN-γ含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);低温艾灸组与模型组相比,TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-13含量变化不显著(均P>0.05)。  (6)结肠组织、腹腔冲洗液中MIF蛋白表达的变化:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织中MIF蛋白表达减少,腹腔冲洗液中MIF蛋白含量明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组、低温艾灸组比较,高温艾灸组大鼠结肠组织中MIF蛋白表达增加,腹腔冲洗液中MIF含量减少,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。  结论:  1.(43±1)℃温和灸天枢穴能促进UC大鼠结肠损伤修复。  2.(43±1)℃温和灸能调节UC大鼠腹腔冲洗液中Mψ吞噬活性。  3.(43±1)℃温和灸能影响UC大鼠腹腔Mψ的功能表型变化,表现为促进Mψ表面CD163表达、上调细胞内ArgⅠ mRNA表达,抑制Mψ表面CD86表达、下调细胞内iNOs mRNA表达。  4.(43±1)℃温和灸可能通过降低UC大鼠腹腔微环境中TNF-α、IFN-γ含量,增加IL-4、IL-13含量,调节腹腔Mψ的分化和吞噬活性。  5.(43±1)℃温和灸能下调腹腔冲洗液中MIF蛋白含量,促进结肠局部MIF蛋白表达。  6.温和灸(43±1)℃温热刺激天枢穴调节UC大鼠Mψ功能表型、吞噬活性及趋化可能是艾灸治疗UC的重要机制。
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