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膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,具有高发病率和高复发率等特点，严重威胁着人们的健康。因此,寻找诊断和治疗膀胱癌的新的生物标志物具有重要意义。近年来,人们对膀胱癌的关注越来越多,大量针对膀胱癌发病原因和机制,以及诊断、治疗等相关研究也获得很大的进展。
环状RNA(CircularRNA,circRNA)是近年来发现的一种新的内源性非编码RNA。circRNA不具有5末端帽子和3末端多聚A尾，呈现闭合环状结构，这种特殊结构使circRNA具有高度的保守性和稳定性。circRNA主要由外显子形成，大量存在于真核细胞中，具有一定的调控功能。研究表明，环状RNA与多种肿瘤的发生、发展及预后相关，可能成为一种新兴的肿瘤生物标志物。
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类短小(长约22个核苷酸序列)的非编码RNA分子，通过碱基互补配对的方式，在转录后水平调控目的基因mRNA的表达，在组织发育、细胞代谢及临床疾病的发生过程中发挥重要调控作用，包括细胞周期、细胞分化、信号传导通路传递等。微小RNA(miRNA-7)是miRNA家族中较为典型的一类miRNA分子，在不同物种间高度保守，通过多个靶基因在不同传导通路水平上发挥调控作用。已有研究显示miR-7不仅在正常组织细胞的发育过程中发挥作用，而且在多种临床疾病的发生中也具有重要的调控作用。
小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellardegeneration-relatedprot-ein1antisense,CDR1as，又名ciRS-7)最先于2011年在人类和鼠类脑组织中发现,其位于染色体Xq27.1处，是小脑变性相关抗原(cerebellardegeneration-relatedantigen1,CDR)1或34基因的反向转录产物。CDR1as长度约为1500个核苷酸，其中90%是有一种18个核苷酸集合(3个GAAGAC六聚体)构成，这种结构使得基因更加保守。抑癌因子miRNA-7（miR-7）在肿瘤组织发生中表达下降，但机制未明。ciRS-7具有miR-7海绵样吸附作用，从而抑制miR-7的功能。
环状RNA与癌症相关miRNA密切相关,并参与了癌症相关通路。环状RNA可能是疾病诊断和预后的理想生物标志物,甚至是未来潜在的治疗靶点。本课题组成功构建了ciRS-7过表达及干扰的稳转膀胱癌细胞株，为后续实验提供了便利，旨在探索ciRS-7在膀胱癌中的表达、对膀胱癌的调控以及可能的作用机制。
目的
1.检测ciRS-7在膀胱癌和正常膀胱上皮细胞中的表达变化
2.构建ciRS-7过表达及干扰稳转株
3.检测ciRS-7过表达及干扰后对细胞增殖、凋亡、迁移的影响
4.探究ciRS-7在膀胱癌细胞中可能的作用机制
方法
1.ciRS-7在膀胱癌细胞株中的表达
培养正常膀胱上皮(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞(5637,T24)，挑取细胞提取RNA,逆转录成cDNA,以此为模板，用ciRS-7特异性引物进行qPCR反应，检测ciRS-7在不同细胞株中的表达量。
2.稳转株的构建
通过酶切、连接构建ciRS-7过表达（pLCDH-ciR）载体及干扰（pLL3.7）载体后转染细胞并进行慢病毒包装，收集病毒液进行病毒感染及筛选，挑取单克隆进行qPCR验证，构建ciRS-7过表达及干扰稳转株。
3.ciRS-7过表达和干扰对细胞功能的影响
实验分为5组，分别为空白对照、过表达对照、过表达、干扰对照、干扰，通过划痕实验、CCK8实验和流式细胞术检测ciRS-7过表达和干扰后对膀胱癌细胞株（5637、T24)迁移、增殖和凋亡的影响。
4.ciRS-7的作用机制
通过生物信息学分析预测ciRS-7下游的靶向miRNA,通过qPCR验证ciRS-7过表达和干扰后miRNA的表达变化，然后通过WB验证ciRS-7/miR-7-5p下游靶向蛋白的表达情况，探究ciRS-7在膀胱癌细胞株中的可能作用机制。
结果
1.ciRS-7在膀胱癌细胞株中的表达量高于在正常膀胱上皮细胞中的表达量。
2.ciRS-7过表达及干扰稳转株构建成功。
3.ciRS-7过表达后膀胱癌细胞的迁移速度增快，增殖率增高，凋亡率降低；ciRS-7干扰后膀胱癌细胞的迁移速度减慢，增殖率降低，凋亡率增高。
4.qPCR和WB结果显示:在膀胱癌细胞过表达ciRS-7后抑制miR-7-5p的表达，促进FAK和IGF-1R的表达；干扰ciRS-7后促进miR-7-5p的表达，抑制FAK和IGF-1R的表达。当用miRNA-7-5pinhibitor抑制miR-7-5p表达后，FAK和IGF-1R的表达增高。
结论
1.成功获得ciRS-7过表达及干扰的膀胱癌稳转株。
2.ciRS-7可能通过ciRS-7/miR-7-5p/FAK(及IGF-1R)在膀胱癌细胞株中发挥促癌作用。
环状RNA(CircularRNA,circRNA)是近年来发现的一种新的内源性非编码RNA。circRNA不具有5末端帽子和3末端多聚A尾，呈现闭合环状结构，这种特殊结构使circRNA具有高度的保守性和稳定性。circRNA主要由外显子形成，大量存在于真核细胞中，具有一定的调控功能。研究表明，环状RNA与多种肿瘤的发生、发展及预后相关，可能成为一种新兴的肿瘤生物标志物。
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类短小(长约22个核苷酸序列)的非编码RNA分子，通过碱基互补配对的方式，在转录后水平调控目的基因mRNA的表达，在组织发育、细胞代谢及临床疾病的发生过程中发挥重要调控作用，包括细胞周期、细胞分化、信号传导通路传递等。微小RNA(miRNA-7)是miRNA家族中较为典型的一类miRNA分子，在不同物种间高度保守，通过多个靶基因在不同传导通路水平上发挥调控作用。已有研究显示miR-7不仅在正常组织细胞的发育过程中发挥作用，而且在多种临床疾病的发生中也具有重要的调控作用。
小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellardegeneration-relatedprot-ein1antisense,CDR1as，又名ciRS-7)最先于2011年在人类和鼠类脑组织中发现,其位于染色体Xq27.1处，是小脑变性相关抗原(cerebellardegeneration-relatedantigen1,CDR)1或34基因的反向转录产物。CDR1as长度约为1500个核苷酸，其中90%是有一种18个核苷酸集合(3个GAAGAC六聚体)构成，这种结构使得基因更加保守。抑癌因子miRNA-7（miR-7）在肿瘤组织发生中表达下降，但机制未明。ciRS-7具有miR-7海绵样吸附作用，从而抑制miR-7的功能。
环状RNA与癌症相关miRNA密切相关,并参与了癌症相关通路。环状RNA可能是疾病诊断和预后的理想生物标志物,甚至是未来潜在的治疗靶点。本课题组成功构建了ciRS-7过表达及干扰的稳转膀胱癌细胞株，为后续实验提供了便利，旨在探索ciRS-7在膀胱癌中的表达、对膀胱癌的调控以及可能的作用机制。
目的
1.检测ciRS-7在膀胱癌和正常膀胱上皮细胞中的表达变化
2.构建ciRS-7过表达及干扰稳转株
3.检测ciRS-7过表达及干扰后对细胞增殖、凋亡、迁移的影响
4.探究ciRS-7在膀胱癌细胞中可能的作用机制
方法
1.ciRS-7在膀胱癌细胞株中的表达
培养正常膀胱上皮(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞(5637,T24)，挑取细胞提取RNA,逆转录成cDNA,以此为模板，用ciRS-7特异性引物进行qPCR反应，检测ciRS-7在不同细胞株中的表达量。
2.稳转株的构建
通过酶切、连接构建ciRS-7过表达（pLCDH-ciR）载体及干扰（pLL3.7）载体后转染细胞并进行慢病毒包装，收集病毒液进行病毒感染及筛选，挑取单克隆进行qPCR验证，构建ciRS-7过表达及干扰稳转株。
3.ciRS-7过表达和干扰对细胞功能的影响
实验分为5组，分别为空白对照、过表达对照、过表达、干扰对照、干扰，通过划痕实验、CCK8实验和流式细胞术检测ciRS-7过表达和干扰后对膀胱癌细胞株（5637、T24)迁移、增殖和凋亡的影响。
4.ciRS-7的作用机制
通过生物信息学分析预测ciRS-7下游的靶向miRNA,通过qPCR验证ciRS-7过表达和干扰后miRNA的表达变化，然后通过WB验证ciRS-7/miR-7-5p下游靶向蛋白的表达情况，探究ciRS-7在膀胱癌细胞株中的可能作用机制。
结果
1.ciRS-7在膀胱癌细胞株中的表达量高于在正常膀胱上皮细胞中的表达量。
2.ciRS-7过表达及干扰稳转株构建成功。
3.ciRS-7过表达后膀胱癌细胞的迁移速度增快，增殖率增高，凋亡率降低；ciRS-7干扰后膀胱癌细胞的迁移速度减慢，增殖率降低，凋亡率增高。
4.qPCR和WB结果显示:在膀胱癌细胞过表达ciRS-7后抑制miR-7-5p的表达，促进FAK和IGF-1R的表达；干扰ciRS-7后促进miR-7-5p的表达，抑制FAK和IGF-1R的表达。当用miRNA-7-5pinhibitor抑制miR-7-5p表达后，FAK和IGF-1R的表达增高。
结论
1.成功获得ciRS-7过表达及干扰的膀胱癌稳转株。
2.ciRS-7可能通过ciRS-7/miR-7-5p/FAK(及IGF-1R)在膀胱癌细胞株中发挥促癌作用。