电场刺激下肥大细胞内钙信号的响应和组胺的释放

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电针治疗,作为针灸治疗的一种补充手段,在临床方面有十分重要的应用,例如:电针镇痛以及偏瘫和中风等各种疾病的治疗。电刺激能够使细胞内部发生一系列的响应,主要的生理学响应即是胞内钙离子浓度的变化以及组胺的释放。在当前的研究中,主要的已有成果的工作是集中研究了在直流或者交流电场中胞内钙离子浓度的变化。研究发现,在给细胞加电场刺激后,胞内钙离子的浓度会出现振荡或者峰值等直接的即时的响应。钙离子浓度增加的来源分别是细胞内钙库(主要是内质网)的释放和外部的溶液中的钙离子的进入(通过细胞膜上的钙离子通道)。但是,电刺激对于细胞作用的机理目前还是没有完全明确。本工作尝试对肥大细胞施以不同频率、不同强度的电场刺激,通过了解细胞膜上钙离子通道开启、关闭的规律,以促进理解电刺激对细胞离子通道的作用,以致电针机理。  肥大细胞是一种众所周知的免疫细胞,对外界的物理刺激可以迅速的发生反应。比如在剪切力,激光和热的刺激下都可以引发诸如肥大细胞内钙离子浓度的升高和组胺释放的一系列行为。组胺和P物质的释放可以引起血管舒张,血管渗透性增加和改善微循环。所以,肥大细胞作为可以调节人体生理功能的细胞是一个很有研究价值的对象。  RBL-2H3肥大细胞被用于很多相关研究中,本文应用该种细胞来研究电刺激下细胞内钙离子浓度的变化以及细胞的脱颗粒机制,进而为电针治疗提供相关建议,并总结出电刺激作用于肥大细胞的机理。在之前其他学者的一些研究中表明,电场的强度对于细胞内钙离子浓度的变化起到至关重要的作用。而本文关注与交流电场的频率对于钙离子浓度以及组胺释放的影响。本工作所用的电场是20V/cm,频率分别为100Hz,1kHz,10kHz,100kHz来分别刺激肥大细胞,来观察胞内钙离子浓度的变化以及组胺的而释放。TRPV通道是肥大细胞膜表面的钙离子通道,这个通道开放后可以使得钙离子从外溶液中流入到细胞内。本工作着重研究了电刺激对于TRPV通道的作用,这将会使我们更好的理解电针治疗的机理。  文章主要的工作是分别给细胞施加100Hz,1kHz,10kHz,100kH的交流电场(电场强度都是20V/cm),并且在两种溶液下(一种是有高浓度钙离子的细胞缓冲液,一种是没有钙离子的细胞缓冲液)进行对照试验,重复试验过程,并且测量组胺的释放量,记录数据。实验发现,电场的频率从100Hz到10kHz变化的过程中,频率越高,其标示胞内钙离子浓度的荧光峰值就越大,组胺的释放量也响应增加。在100Hz的时候钙离子的浓度与不加电场时的对照组类似,无论是钙离子浓度还是组胺的释放量都在10kHz的时候达到最大。在100kHz的情况下,钙离子的浓度和组胺的释放量均有所降低。为了验证细胞内钙离子增加的来源,我们还应用到了钌红(一种可以阻断TRPV通道的阻断剂)来组胺TRPV通道,进而验证是否TRPV通道即使电场刺激下细胞膜上钙离子通道的作用靶点。实验发现,在10kHz的情况下,外溶液含钙离子时候胞内钙离子的浓度是对照组(未施加电刺激)的3.5倍,而外溶液不含钙离子的时候胞内钙离子的浓度仅是对照组的2.2倍。在组胺释放的试验中也发现了类似的现象。钌红的应用可以明显的降低(约降低75%)胞内钙离子的浓度,使得钌红对照组的峰值大小与无外钙溶液的相似,进而说明了TRPV通道正是电刺激下细胞膜上的作用通道,在电刺激的情况下,外溶液中的钙离子正是通过TRPV通道进入到细胞内,同时释放组胺。本工作表明,10kHz的交流电场最适合得钙离子通道开放,导致钙流入并且最终导致组胺的释放。因此可以说明电针治疗的机理。
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