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目的:慢性乙型肝炎的患者常常由于各种因素会伴随着肝硬化及肝癌的高风险。免疫反应（表现为慢性炎症反应和抗病毒效应）是慢性乙型肝炎病毒导致这些风险非常重要的因素。核苷酸类似物是慢性乙肝患者的最常用的抗病毒治疗药物之一，核苷酸类似物具有抑制HBV的复制，减轻肝损伤，减缓病情的进展的作用。恩替卡韦作为新一代的鸟嘌呤核苷酸类似物，对乙肝病毒（HBV）多聚酶具有抑制作用。 CD4+T helper细胞能够通过调节释放细胞因子调控免疫反应，可以分为辅助性T细胞1型(T help cell1，Th1)、辅助性T细胞2型(T help cell2，Th2)和调节性T细胞(regulatoryT cells，Treg)。最近的研究发现慢性乙型肝炎患者体内外周血和肝脏中Treg细胞数目增多。随着Treg水平的增高，HBV-DNA的水平也在增高，表现为抑制HBV特异性免疫反应并呈现出剂量依赖效应，而Treg的缺陷则导致HBV特异性CD4+和CD8+细胞增殖和IFN-r分泌的增加。这些研究结果都表明Treg细胞参与了抗HBV反应，而在慢性乙肝患者中，Th17含量也明显增高，并被认为是一种能够触发肝损伤的细胞。但至今为止Th17在抗病毒中的机制还处于研究中。令人意外的是，已有研究表明，恩替卡韦在抑制HBV的DNA复制的同时能够降低Treg/Th17比率，但是至今机制不明。现已有研究表明，mTOR可以通过调控HIF-1a来调节Treg/Th17比率。 基于上述原因，我们拟通过建立模拟乙肝病毒刺激CD4+T细胞分化细胞模型，选择用于抗乙肝病毒的临床一线药物恩替卡韦，验证恩替卡韦通过激动mTOR来调控HIF-1a而导致Treg/Th17比率降低及设想。 方法:清晨空腹肘静脉采血12ml，肝素抗凝，等体积的PBS充分混合，缓慢加入含有等体积的人淋巴细胞分离液的离心管中，1500r/min(离心半径为17cm)，离心20min，吸取中间的白细胞膜层即为PBMC，充分洗涤后用配好的1640培养基（内含有10％胎牛血清FCS的RPMI1640以及浓度为20ng/ml的IL-2），将细胞密度调整为1*106个/ml。将细胞分为A、B、C、D四组。其中A组为HBcAg+雷帕霉素+恩替卡韦干预组，B组为HBcAg+恩替卡韦干预组，C组为HBcAg干预组，D组为对照组。HBcAg干预时间为30天，雷帕霉素和恩替卡韦的干预均在HBcAg干预30天之后进行。对A、B、C、D四组分别进行CD4+细胞分离，通过流式细胞学技术检测Treg和Th17细胞，并对四组细胞内HIF-1a、IL-17A、Foxp3进行蛋白印记检测。 结果: 1流式细胞结果表明，与D组比较，A、B、C三组中Th17含量明显增高(P＜0.05)，Treg含量明显下降(P＜0.05);与C组比较，B组中Th17细胞含量明显升高(P＜0.05)，Treg含量明显下降(P＜0.05);与B组比较，A组中Th17细胞含量明显下降(P＜0.05)，Treg含量明显上升(P＜0.05)。 2蛋白免疫印记试验结果表明，与C组相比，B组中HIF-1a表达显著升高(P＜0.05)，IL-17A表达升高(P＜0.05)，Foxp3的表达下降(P＜0.05)。与B组相比，A组中HIF-1a表达显著下降(P＜0.05)，IL-17A表达下降(P＜0.05)，Foxp3的表达上升(P＜0.05)。 结论: 1乙肝核心抗原能够增加Th17细胞数，降低Treg细胞数，表明乙肝核心抗原诱发类似抗乙肝病毒的免疫分化。 2恩替卡韦可以增加Th17细胞数，降低Treg细胞数，这可能是恩替卡韦抗病毒作用的机制之一。 3恩替卡韦增加Th17细胞数和降低Treg细胞数的作用可以被mTOR阻断剂雷帕霉素所拮抗，表明恩替卡韦的促表达作用可能与激动mTOR信号通路相关。