天麻共生蜜环菌及同属真菌的基因系谱学及药用成分的研究

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蜜环菌属[Armillaria(Fr.:Fr)Staude.]真菌是一类有着重要经济价值的真菌。是世界上最大的生物。这类真菌在全球范围内都有分布,其中大部分是林业的病害菌,危害森林和果树,也有可与传统中药天麻共生并提供其营养的蜜环菌(以下简称为天麻蜜环菌)。蜜环菌属真菌形态变异很大,以至于该属的分类一直比较混乱。天麻蜜环菌是伴栽天麻所必须的,又是一种药食两用菌,并且作为商业种在市场上销售,澄清其分类显得至关重要;临床证明天麻蜜环菌与天麻具有相似的药效,但目前有关两者间是否具有相同成分还未见报道。所以探索天麻蜜环菌中的药效成分也很有意义。   基于以上两点,本实验对来源不同的天麻蜜环菌的核糖体rRNA基因内间隔转录区(internaltranscribedspacer,ITS),基因间隔区(intergenicspacers,IGS)以及核糖体大亚基(largesubunit(28s)ofribosomalRNAgenes)进行扩增,并对序列与从Genebank中下载的相关序列进行系统学研究,并且对这些天麻蜜环菌的生物学特性以及多糖的含量做了相应的研究,最后,为了检测天麻蜜环菌中是否含有与天麻相同的物质,选用天麻素作为指标,天麻样品作为对照,采用高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测。 本论文旨在对天麻共生蜜环菌的系谱学进行研究。实验采用核酸序列分析法,扩增并测序了19株来源不同的天麻蜜环菌的ITS,IGS1以及28SrDNA区段,根据所得数据和GeneBank中的已知相关序列来构建系统发育树,分析方法采用maximumparsimony,maximumlikelihoodandneighbour-joining法。所有供试菌株在28SrRNAgene序列区段高度保守,而从ITS以及IGS序列排序中可以发现有个别碱基的转换或颠换,插入或缺失。结果表明:系统发育树显示表明19株菌株均确定为蜜环菌属真菌,而其中只有菌株AM234确定到种,与Armillariamellea为同一种。推测天麻共生蜜环菌不只是Armillariamellea,可能存在多个种,并且是与A.hinnulea,A.tabesce,A.mellea,A.limonea距离较远的种;BY1,BY2,DZ这三株菌株为密切相关的一族,这三株菌株,分离自贵州省百宜和道真天麻。IGS1比ITS鉴别蜜环菌属真菌种及种下的能力强,而28SrDNA区段则由于太保守而不适合做蜜环菌属真菌种及种下的分析;旨在对所选天麻蜜环菌菌索的多糖含量进行初步的评价,筛选出多糖含量较高的菌株,为商业化生产进行提供基础研究。实验采用蒽酮-硫酸法测定不同来源蜜环菌菌株菌索的多糖含量。结果表明:所有菌株都含有多糖,但差异较大。菌株中多糖含量低的是AM234和5-722,含量分别为52.37645mg/g和49.51301mg/g;多糖含量最高的是来自于青海的XB-3,含量为145.3466mg/g,大约为AM234的3倍,其它菌株含量在90-117mg/g之间;旨在从蜜环菌中找到与天麻相同的物质,由于天麻素为药典中规定的天麻药用成分,所以选用测定天麻素为指标,采用HPLC法,实验结果表明:部分蜜环菌菌索中含有天麻素,而且含量还有差异,含量较高的有3个,分别是:DZ为0.403mg/g,AM234为0.365mg/g,BY1为0.331mg/g;含量较低的XB-6为0.131mg/g,XB-4为0.258mg/g,XB-1为0.070mg/g,,在对照品天麻中天麻素含量为1.661mg/g,约为DZ的4倍。在蜜环菌中发现天麻素,目前还没有看到相关的报道,根据这一发现,我们可以选用天麻素作为指标,筛选出更多的产天麻素的蜜环菌,并通过生物工程的手段改良菌种,为产业化提供生产种。为我国的中药现代化进程注入新的活力。
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