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目的:本实验基于蛋白质组学技术,以3月龄小鼠作为对照,研究自然增长1 6月龄小鼠肝线粒体差异蛋白表达情况,探析与衰老相关的蛋白标志物和生物途径,以及六味地黄丸对衰老相关蛋白标志物和通路调节情况。为阐明衰老进程机制及六味地黄丸干预与小鼠自然增龄相关证候的生物学基础提供依据。方法:本实验选取60只SPF级ICR小鼠作为实验研究对象,将自然增龄16月龄小鼠随机分为模型组和给药组,每组小鼠各10只雄性、10只雌性;另选取3月龄雄性小鼠10只、雌性小鼠10只为空白组,空白组与模型组采用同体积百分比的生理盐水灌胃,给药组以六味地黄丸药液灌胃给药。连续灌胃3 0天后,制备肝组织线粒体样本,基于iTRAQ技术,联合进行LC-MS/MS质谱分析,通过UniProt数据库分析鉴定相关线粒体差异蛋白,运用GO分析、KEGG分析技术筛选得出自然增龄模型中小鼠的肝组织线粒体蛋白标志物及六味地黄丸对其干预的相关蛋白标志物,鉴定与六味地黄丸干预作用相关性最高的蛋白标志物及通路。结果:1.模型组对比空白组肝线粒体样本蛋白标志物,筛选出核孔复合蛋白Nup98、肌球蛋白轻链3、细胞色素P450 4A10等与衰老相关差异蛋白标志物及胰岛素信号途径、内噬作用、代谢途径等生物通路。2.六味地黄丸对自然增龄过程中的差异蛋白具有调节作用,主要调节包括:核糖体结合蛋白1、核孔复合蛋白、NAD激酶、丝氨酸/精氨酸重复基质蛋白1、整合素α-9等。3.运用GO分析得出,六味地黄丸主要参与了药物代谢的过程、嘌呤核苷单磷酸代谢的过程、有机物的运输、代谢过程等多种生物代谢过程;参与合成线粒体、内质网膜等重要细胞组分;参与了含有多种蛋白质的复合物结合、催化活性、氧化还原酶活性、肌动蛋白丝活性结合等对分子生理功能的调节。4.通过运用KEGG方法分析实验结果可以得出,六味地黄丸主要药理作用包括参与氧化磷酸化、胰岛素信号通路、甘氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢、内质网蛋白质加工、肥厚型心肌病等多种相关信号通路的生理功能调节。结论:1.本实验运用蛋白组学技术探析自然增龄模型小鼠肝组织线粒体蛋白标志物,探讨并鉴定六味地黄丸对自然增龄16月小鼠干预作用与衰老相关差异蛋白标志物。2.1 6月龄与3月龄对比,六味地黄丸的干预可有效调节核糖体结合蛋白1、核孔复合蛋白Nup98-Nup96、丝氨酸/精氨酸重复基质蛋白1等差异蛋白,其主要富集于氧化磷酸化、胰岛素信号通路、甘氨酸,丝氨酸和苏氨酸的代谢、内质网蛋白质的加工、肥厚型心肌病等5条与衰老作用密切相关的信号通路,这表明六味地黄丸的干预可以有效改善因自然增龄情况而可能出现的与人体阴虚作用密切相关的各种生物学反应变化。