【摘 要】
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在已有研究的基础上,该文深入进行RI基因方面的研究.该论文的研究目的是RI的基因工程和RI在基因治疗方面的应用,为此做了以下的一些工作:1.克隆了RI基因:从传代培养的人肝细
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在已有研究的基础上,该文深入进行RI基因方面的研究.该论文的研究目的是RI的基因工程和RI在基因治疗方面的应用,为此做了以下的一些工作:1.克隆了RI基因:从传代培养的人肝细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增了ri基因,全长为1425bp. 2.RI原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的基因工程表达:选用pET-23b构建原核表达载体. (1)利用PCR方法在ri基因的两端分别引入NdeI和XhoI酶切位点,酶切后将其插入pET23bp, 构建非融合表达载体ET23b-ri(A).3.RI真核表达载体的构建:在NdeI/XhoI位点,从pET23b-ri(A)上切下ri基因片段.补平后在HpaIp位点插入逆转录病毒载体pLNCX,构建逆转录病毒真核表达载体pLNCX-ri.4.pLNCX-ri转染肿瘤细胞及其肿瘤细胞中的过表达:用脂质体的针重组的真核表达载体转染C6神经胶持胞.5.提纯RI制备抗血清,用于RI的免疫检测:用亲和层析方法,从人胎盘中提取核糖核酸酶抑制因子.经SDS-PAGE电泳检测分子量为50kDa,比活为70uni5/ug蛋白 .免疫日本大耳白兔,制备抗血清.ELISA法测定抗血清效价高于5000W,可用于estern-blot等实验.
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