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对硫磷农药由于其高毒性已被世界各国禁止在农业上使用，但违法使用现象仍然十分严重，造成食物和环境中普遍存在农药残留的问题，需要对其加强监测。酶联免疫分析方法被认为是一种灵敏、高效、稳定、低成本的微量农药残留筛查检测手段，可弥补大型精密仪器确证技术和酶法检测技术的不足。本文较系统地研究了对硫磷的酶联免疫吸附分析方法和化学发光酶联免疫分析方法，主要内容与结果如下： (1)根据对硫磷的结构特点，设计合成了具有苯环和硫代磷酸酯基团两大特征结构、手臂为3和5个碳原子长度的两种半抗原。使用活泼酯法制备了1种免疫抗原和2种包被抗原。通过质谱与核磁共振等波谱技术对半抗原进行鉴定，用紫外扫描和三硝基苯磺酸法对人工抗原进行鉴定，半抗原与人工抗原均合成成功。 (2)通过免疫新西兰大白兔制备了对硫磷的兔多克隆抗体。新西兰大白兔经6次免疫后取血，经过辛酸-硫酸胺方法纯化血清得到对硫磷兔多克隆抗体。该多克隆抗体的效价为1.24×106，对1μg/mL对硫磷有70％的抑制率。 (3)通过对包被抗原浓度、抗体稀释倍数、pH、反应时间等参数进行优化，建立了对硫磷的icELISA检测方法。该方法检测线性范围为3.39-533.05 ng/mL，半抑制浓度为21.39 ng/mL，最低检测限为0.90 ng/mL，对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为75.6%-127:4%，与HPLC方法相关系数R2为0.946。 (4)通过对包被抗原浓度、配标记抗体稀释倍数、pH、反应时间等参数进行了优化，建立了对硫磷的dcCLEIA检测方法。该方法检测线性范围为2.24-160.02 ng/mL，半抑制浓度为23.11 ng/mL，最低检测限为0.15 ng/mL，操作时间45 min，比icELISA方法减少一半，对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为73.7%-120.1%，与HPLC方法相关系数R2为0.940。 (5)通过对包被抗原浓度、抗体稀释倍数、pH、反应时间等参数进行了优化，建立了对硫磷的icCLEIA检测方法。该方法检测线性范围为0.24-15.83 ng/mL，最低检测限为0.09 ng/mL，半抑制浓度为1.14 ng/mL，比icELISA方法低20倍，对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为74.6%-121.0%，与HPLC方法相关系数R2为0.986。