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目的观察玻璃体腔重复注射抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体bevacizumab(商品名Avastin)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜的毒性作用,探讨bevacizumab在治疗DR时可能有的毒性作用,为DR和其他视网膜新生血管性疾病的临床防治提供基础理论依据。方法1.健康成年雄性SD大鼠40只,随机分成正常对照(A)组和糖尿病组,分别为10、30只。链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)尾静脉注射制作糖尿病大鼠模型。溴化乙锭(Evans blue,EB)染色视网膜铺片证实DR模型成功后,30只糖尿病大鼠中,随机选取10只作为DR组(B组),不作任何处理；其余20只大鼠左眼为实验组(C组),玻璃体腔注射25 mg/ml的bevacizumab 3μ1,共注射3次,每次间隔10d；右眼为实验对照组(D组),不给予任何处理。2.于C组末次干预后20天,采用闪光视网膜电图(Flicker Electroretinogram,F-ERG)对各组进行视网膜功能检测。EB染色视网膜铺片方法,荧光显微镜观察各组视网膜血管的变化情况；苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察视网膜形态学变化；免疫组化SP法观察视网膜各层Thy-1及VEGF阳性染色情况。3.所有数据应用SPSS13.0统计分析软件包进行统计学分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,经正态性检验及方差齐性检验,对不同处理组间的数据采用单因素方差分析,并用SNK检验进行组间比较。以P<0.05作为差异有统计学意义的标准。结果1.F-ERG检测检查显示,A、B、C、D 4组暗适应a、b波潜伏期,暗适应b波振幅及振荡电位Ops总振幅比较,差异均有统计学意义(F=33.165,36.162,19.955,23.243:P值均=0.000)；进一步用SNK法进行组间两两比较,B组,D组的暗适应a波潜伏期、暗适应b波振幅、振荡电位Ops总振幅与A组,C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)；A组,C组暗适应b波潜伏期与B组,与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)；B组与D组的暗适应b波潜伏期比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。2.EB染色视网膜铺片A组大鼠视网膜血管走行良好,视网膜浅层大血管及深层血管网均清晰可见,未见视网膜微血管瘤和视网膜新生血管形成。B组大鼠视网膜血管走行迂曲、扩张,可见微动脉瘤,血管呈串珠样改变,血管周围可见高荧光渗漏,周边视网膜可见大片无灌注区。C组玻璃体腔重复注射bevacizumab3次后,视网膜血管走形规则、变细。D组大鼠视网膜可见微血管瘤,血管周围高荧光渗漏较B组减少。3.HE染色A组大鼠视网膜层次结构整齐分明,RGCs排列整齐；内、外核层细胞核染色深紫,均匀；光感受器细胞内外节形态规整；视网膜色素上皮(RPE)细胞核呈淡紫色,扁椭圆形,边界清晰。B组大鼠视网膜各层细胞结构排列紊乱,内界膜不完整；视网膜内血管扩张,血管内皮细胞增殖；RGCs、周细胞等各层细胞数减少。C组玻璃体腔重复注射bevacizumab3次后,RGCs数量明显低于正常,光感受器细胞也低于正常。D组视网膜内界膜增厚,局部不完整,未见明显扩张血管,各层细胞排列不整齐。4.免疫组织化学染色Thy-1阳性染色主要位于神经节细胞层(ganglion cell layer,GCL),及少数位于内丛状层(inner plexiform layer,IPL)、内核层(inner nuclear layer,INL)。A组Thy-1表达呈强阳性,GCL染色明显,神经纤维层(nerval fiber layer,NFL)、INL轻度染色；B组Thy-1表达呈弱阳性,主要位于GCL,; C组Thy-1染色明显减弱,GCL阳性表达稀少；D组Thy-1表达呈弱阳性,阳性染色主要位于GCL,也可见于INL。A、B、C、D四组间染色区Thy-1的平均IOD差异有统计学意义(F=25.819, P=0.000),进一步用SNK法进行组间两两比较,C组与其他三组之间差异有统计学意义(P<0.05),B组与A组之间差异有统计学意义(P<0.05),D组与B组之间差异也有统计学意义(P<0.05)。VEGF阳性表达主要定位于GCL,少量位于NFL, INL及RPE层。A组VEGF表达呈弱阳性,主要位于GCL; B组VEGF表达呈强阳性,主要位于GCL、NFLINL也有表达；C组VEGF表达明显减少,主要位于GCL；D组VEGF表达呈弱阳性,主要位于GCL和INL层,RPE层也有表达。染色区域VEGF的平均IOD值在A、B、C、D四组之间差异有统计学意义(F=45.243, P=0.000),进一步用SNK法进行组间两两比较,B组与其他三组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、玻璃体腔重复注射bevacizumab治疗DR,对RGCs有一定毒性作用。2、玻璃体腔重复注射bevacizumab治疗DR,对视网膜血管造成一定损伤,使视网膜的血管变细。3、玻璃体腔重复注射bevacizumab治疗DR,对对侧眼有一定的影响。