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该实验成功构建了重组质粒pcDNA3.1/mGM-CSF/Myc-His(-)(A)(简称为pc-mGM-CSF),建立了肿瘤动物模型,然后基因免疫小鼠,观察GM-CSF的治疗效果,为肿瘤的治疗提供一种新的思路和方法.该实验分为两个部分:一、重组质粒pc-mGM-CSF的构建、表达和活性鉴定目的构建pc-mGM-CSF重组质粒载体,为研究GM-CSF治疗肿瘤奠定基础.方法通过RT-PCR从Balb/c小鼠脾脏中获得mGM-CSF基因,克隆于pcDNA3.1/Myc-His(-)(A)质粒上,用PCR、酶切及基因测序方法分别鉴定pc-mGM-CSF,然后用脂质体将其转染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,用G418筛选后通过RT-PCR和SDS-PAGE鉴定mGM-CSF表达,将转染SP2/0的上清加入mGM-CSF依赖株NFS-60细胞,检测蛋白活性.结果重组质粒中含有mGM-CSF基因,在SP2/0中能表达,且其表达产物能分泌到细胞外并具有生物学活性.结论该实验成功构建含mGM-CSF真核表达重组质粒,有助于进一步研究其协同抗肿瘤作用.二、mGM-CSF基因免疫诱发小鼠协同抗肿瘤作用目的通过mGM-CSF基因免疫小鼠以诱发小鼠对肿瘤的免疫应答,为GM-CSF基因治疗肿瘤打下基础.方法用SP2/0肿瘤细胞皮下接种Balb/c小鼠建立肿瘤动物模型,再以皮下或肌肉注射空质粒或重组质粒,8w后观察致瘤率、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润情况、检测血清中IFN-γ和IL-2浓度以及MTT法体外检测CTL、NK细胞活性.结果基因免疫Balb/c小鼠8w后,重组质粒皮I下注射组肿瘤重量(0.880±0.405g)轻于对照组(1.548±0.221g)(P<0.05);重组质粒肌肉注射组肿瘤重量(0.378±0.411g)明显轻于对照组(1.554±0.249g)(P<0.001);重组质粒肌肉注射组肿瘤重量(0.378±0.411g)轻于重组质粒皮下注射组(0.880±0.405g)(P<0.05);重组质粒肌肉注射组肿瘤组织可见明显的淋巴细胞浸润;IFN -γ和IL-2的浓度明显高于其它组;CTL、NK细胞活性明显高于对照组.结论GM-CSF基因免疫能诱发协同抗肿瘤作用,肌肉注射比皮下注射效果好;GM-CSF基因免疫为治疗肿瘤提供一种新的思路.