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矽肺是由于长期吸入游离二氧化硅粉尘所引起的以肺间质纤维化为主的全身性疾病,危害人群相当广泛。目前对矽尘暴露人员尚无有效的早期诊断(筛检)和健康监护的方法,一经传统的后前位胸片确诊为矽肺,病人肺部的纤维化进程已无药物可逆转。因此,寻找用于矽肺早期诊断和肺纤维化进程评价的生物标记物对预防、治疗乃至最终消除矽肺具有重要意义。后基因组时代蛋白质芯片技术的出现极大地推动了蛋白质组学的发展,该技术通过不同的表面修饰而选择性地捕获蛋白质,具有快速、简单、敏感、样本用量少等优点,尤其适合应用于对疾病特异性生物标记物的筛选研究。矽肺的发生、发展过程中存在着许多蛋白质在成分和数量上相应的改变,这些蛋白质的存在使得矽肺生物标记物的筛选成为可能。
旧的:利用蛋白质芯片技术,筛选有助于早期诊断矽肺的血清特异性生物标记物,旨在为矽肺的早期诊断提供依据。
方法:同期统一技术手段采集研究对象血清,严格按照纳入标准,分别得到研究对象含矽尘暴露人员0组、0+组、Ⅰ期组及正常对照组各20份血清置-80℃冰箱冻存备用。将处理好的血清样品加样于美国赛弗吉公司生产的新一代弱阳离子交换芯片(CM10)上,用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机,自动收集蛋白质峰,设有意义峰的最低信噪比为5,最小峰阈值为30%。以赛弗吉公司相应的软件CiphergenProteinChipSoftware3.1分析分组数据及相关性,用BioMarkerWizard软件对不同组相同质荷比(M/Z)的蛋白质相对含量数据进行统计分析,寻找差异表达的标志分子。
结果:1研究对象的基本情况:各组选择研究对象的年龄、血压、肝功能、血常规检查等在统计学上的差异无显著性(P>0.05);而反映肺功能的指标肺活量和各组矽尘暴露人员的接尘工龄在统计学上的差异均有显著性(P<0.05)。
2蛋白指纹图谱的差异表达:矽尘暴露组与正常对照组相比,发现M/Z为2746、3269、3402、3941、4184、5488、5914、6122、7572、7937的10个标志分子在矽尘暴露人员与正常人的血清中差异表达,相对含量变化具有统计学意义(P<0.05)。其中M/Z为2746的分子在正常人血清中低表达,在矽尘暴露人员血清中高表达,相反,M/Z为4184、5914和6122的分子在正常人血清中高表达,在矽尘暴露人员血清中低表达;矽尘暴露人员各组间对比,发现M/Z为2938、3269、3821、4095、5071、5483、5640的7个标志分子在矽尘暴露人员血清中差异表达,相对含量变化具有统计学意义(P<0.05)。其中M/Z为5071、5483和5640的分子在矽尘暴露人员0组和0+组中均为低表达,而在Ⅰ期组中高表达。
结论:研究对象的选择符合实验要求,具有可比性;M/Z为2746、4184、5914和6122的分子的相对含量变化可能是矽肺病人与正常人的鉴别诊断指标,而M/Z为5071、5483和5640的分子的相对含量变化可能成为矽肺的早期诊断指标;蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中矽肺的标志分子可能是一种行之有效的技术。