基于iTRAQ的蛋白组学技术筛查泡球蚴病患者血清特异性标志物的初步研究

来源 :青海大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yqmaidou
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目的:应用i TRAQ标记联合LC-MS/MS技术筛查AE患者血清中的差异表达蛋白,初步筛选AE血清早期诊断的特异性标志物。方法:1.收集2016年1月-2016年5月期间在青海大学附属医院肝胆胰外科住院经彩超、CT、MRI或手术后病理确诊的HAE患者血清3例及伴随肝外转移AE患者血清3例,同时收集健康体检者血清2例作为对照。2.将收集的血清8例经去血清高丰度蛋白、电泳及酶解后采用iTRAQ 8-plex标记技术进行标记(其中健康体检者A组标记“113、114”,HAE患者B组标记“115、116、117”,伴随肝外转移AE患者C组标记“118、119、121”)。3.使用高分辨质谱仪Q Exactive(Thermo Scientific)行质谱分析,用软件Mascot2.5和Proteome Discoverer2.1蛋白质鉴定软件对UniProt蛋白质数据库进行搜索,以报告基团“113、114”的相对含量作为参照对象,选择差异具有显著的的结果(p<0.05),高于1.2或低于0.83的倍数变化被认为显著上调或下调,并应用GO分类、KEGG通路等数据库平台对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:1.成功建立泡球蚴患者血清及健康人血清蛋白质图谱,共得到图谱265101张,鉴定肽段匹配到的图谱数量是57943张,鉴定到的肽段总数13061个,鉴定到的唯一肽段总数6104个,鉴定到的蛋白质总数964个。2.B组与A组相比较,有84种差异表达蛋白,其中9种差异表达蛋白在B组表达上调,75种差异表达蛋白在B组表达下调;C组与A组相比较,有130种差异表达蛋白,其中12种差异表达蛋白在C组表达上调,118种差异表达蛋白在C组表达下调。进一步对比分析发现有36种差异蛋白同时在B、C两组组低表达。3.通过对差异表达蛋白行GO功能注释及GO富集分析发现:差异表达蛋白主要参与的生物过程为单一生物过程、生物调节、刺激反应;具有的分子功能主要是催化活性、整合作用、酶调节;所处的细胞位置主要是胞内细胞器。通过对差异表达蛋白行KEGG通路注释及KEGG富集分析发现:差异表达蛋白在AE患者体内的细胞周期调控、信号转导、蛋白质降解等生物学功能中发挥着十分重要的作用。结论:初步建立泡球蚴患者血清及健康人血清蛋白质图谱,筛选出Cathepsin G、14-3-3 protein theta、Lactoferrin、Membrane cofactor protein、UBE2L 3,isoform CRA_a、UBE2 D3等36种差异表达蛋白,并对差异表达蛋白的生物信息简要分析,为进一步探索泡球蚴发病及进展机制、寻找诊断标志物提供了新依据,这36种差异表达蛋白可作为早期诊断AE的候选特异性标志物。
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