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目的：通过复制PLGC大鼠模型，检测miR-216b/beclin-1自噬通路中相关基因及蛋白的表达，研究金果胃康胶囊对PLGC大鼠miR-216b/beclin-1信号通路的调控作用，阐明金果胃康胶囊治疗PLGC的作用机制。
方法：雄性SPF级Wistar大鼠90只，随机分为造模组80只、空白组10只。造模组采用MNNG(150ug/mL)负荷雷尼替丁(0.03g/kg)、乙醇(45%)及饥饱失常的综合造模法，连续造模16周。第16周造模组和空白组大鼠各随机取3只，取材后观察胃组织病理学变化，确认造模结果。造模成功后，运用随机数字表法将造模大鼠分为模型组、3-MA组、雷帕霉素组、叶酸组和金果胃康胶囊高、中及低剂量组，每组11只。空白组及模型组每日灌胃去离子水，金果胃康胶囊高、中、低剂量组给药浓度分别为1.8g/(kg·d)、0.9g/(kg·d)、0.45g/(kg·d)，3-MA组给药浓度为1.6mg/(kg·d)，雷帕霉素组给药浓度为2mg/(kg·d)，叶酸组给药浓度为2mg/(kg·d)，2ml/只/日，连续给药8周。于第24周末禁食16h后取材，HE染色光镜下观察各组胃黏膜病理学改变，采用qPCR技术检测miR-216b和beclin-1mRNA的表达，Westernblot技术检测beclin-1的蛋白表达，免疫荧光法检测Vps34、UVRAG、Atg14L、Ambra1及Bcl-2蛋白的表达，并比较各组间差异。
结果：1.HE染色观察：空白组黏膜上皮形成胃小凹，排列紧密、规则，固有腺体形态规则、分布均匀、极性好，间质未见淋巴细胞及中性粒细胞的浸润。模型组黏膜上皮结构紊乱，腺体减少、排列稀疏，可见杯状细胞、或异型的细胞，核染色质多而粗糙、重叠，局部腺管扩张，腺腔边界欠清晰，间质见少量炎性细胞的浸润。金果胃康高剂量组黏膜细胞形态均一、排列整齐，腺体分布均匀、极性较好，间质未见炎性细胞浸润。金果胃康中剂量组黏膜腺体减少，固有层内少有炎性细胞浸润。金果胃康低剂量组、3-MA组及叶酸组黏膜见异型的细胞，极性较差，核染色深或呈杆状，腺管扩张、分支，间质有少量炎性细胞的浸润。雷帕霉素组黏膜固有腺体内见杯状细胞，间质局部见少量炎性细胞浸润。
2.qPCR结果
①miR-216b的表达情况：空白组较PLGC模型大鼠各组均显著降低(P＜0.01，P＜0.05)。模型组miR-216b表达较3-MA组、金果胃康低剂量组升高不明显(P＞0.05)，较其余各组均显著升高(P＜0.01)。金果胃康各剂量组均能降低miR-216b的表达，尤以高剂量组明显。3-MA组miR-216b的表达水平最高，与除模型组外的其余各组差异显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组miR-216b的表达水平，较叶酸组、雷帕霉素组更低，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
②beclin-1mRNA的表达情况：空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01)。相较模型组，除3-MA组外的其余各组beclin-1mRNA表达均显著升高(P＜0.01)。金果胃康各剂量组的表达均升高，尤以高剂量组显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组beclin-1mRNA表达水平高于叶酸组、雷帕霉素组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.Westernblot结果
beclin-1蛋白的表达情况：即Beclin-1/β-actin灰度值的比值，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01)。相较模型组beclin-1的蛋白表达，3-MA组明显减小(P＜0.01)，金果胃康低剂量组增大不明显(P＞0.05)，其余各组均明显增大(P＜0.01)。金果胃康各剂量组中，高剂量组增大更显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组beclin-1的蛋白表达水平，高于叶酸组、雷帕霉素组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
4.免疫荧光结果
①Vps34蛋白的表达情况：Vps34蛋白荧光强度，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01,P＞0.05)。较模型组荧光强度，3-MA组减弱(P＜0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康各剂量组中，高剂量组较中、低剂量组荧光强度增强更显著(P＞0.05,P＜0.01)。金果胃康高、中剂量组与雷帕霉素组、叶酸组荧光强度的差异无统计学意义(P＞0.05)。
②UVRAG蛋白的表达情况：较空白组，其余各组UVRAG蛋白荧光强度均减弱(P＜0.01)，其中3-MA组最弱(P＜0.01)。较模型组荧光强度，金果胃康低剂量组增强不明显(P＞0.05)，3-MA组减弱明显(P＜0.01)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康高剂量组较金果胃康低、中剂量组及雷帕霉素组，荧光强度增强显著(P＜0.01，P＜0.05)。金果胃康高剂量组与叶酸组的荧光强度差异无统计学意义(P＞0.05)。
③Atg14L蛋白的表达情况：较空白组，其余各组Atg14L蛋白荧光强度均减弱(P＜0.01)。较模型组荧光强度，3-MA组减弱、金果胃康低剂量组增强的程度不明显(P＞0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康高剂量组较中、低剂量组的荧光强度增强明显(P＜0.01，P＜0.05)，金果胃康高剂量组、叶酸组及雷帕霉素组荧光强度的差异无统计学意义(P＞0.05)。
④Ambra1蛋白的表达情况：Ambra1蛋白荧光强度，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01,P＜0.05)。较模型组荧光强度，3-MA组明显减弱(P＜0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01，P＜0.05)。金果胃康各剂量组中，高剂量组较中、低剂量组的荧光强度增强更显著(P＜0.01)。雷帕霉素组Ambra1蛋白荧光强度，较金果胃康高剂量组、叶酸组增强，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
⑤Bcl-2蛋白的表达情况：较空白组，其余各组Bcl-2蛋白荧光强度均显著增强(P＜0.01，P＜0.05)，其中3-MA组的荧光强度最强(P＜0.01)。较模型组，3-MA组(P＜0.01)及金果胃康低剂量组(P＞0.05)的荧光强度增强，其余各组强度均减弱(P＜0.01)。金果胃康高、中剂量组的荧光强度低于低剂量组(P＜0.01)，金果胃康高剂量组较叶酸组、雷帕霉素组的荧光强度弱，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：
1.本研究采用MNNG(150ug/ml)负荷乙醇(45%)、雷尼替丁(0.03g/kg)及饥饱失常的综合造模法，连续造模16周后，经病理结果证实成功制备了PLGC大鼠模型。
2.金果胃康胶囊对PLGC大鼠的一般情况，及胃黏膜萎缩、肠化及异型增生病理改变，有明显的改善作用，尤以高剂量组显著。
3.金果胃康胶囊可以抑制PLGC大鼠miR-216b的过表达，促进beclin-1在转录与翻译水平的阳性表达；上调beclin-1复合体中Vps34、UVRAG、Atg14L、Ambra1蛋白的表达，下调Bcl-2蛋白的表达。提示金果胃康胶囊可能通过抑制miR-216b对beclin-1mRNA的负调控，激活beclin-1的表达，同时调节beclin-1复合体中各蛋白的表达失常，即通过调控miR-216b/beclin-1信号通路，促进细胞自噬，从而发挥胃黏膜保护作用，高剂量组的疗效相对最佳。
方法：雄性SPF级Wistar大鼠90只，随机分为造模组80只、空白组10只。造模组采用MNNG(150ug/mL)负荷雷尼替丁(0.03g/kg)、乙醇(45%)及饥饱失常的综合造模法，连续造模16周。第16周造模组和空白组大鼠各随机取3只，取材后观察胃组织病理学变化，确认造模结果。造模成功后，运用随机数字表法将造模大鼠分为模型组、3-MA组、雷帕霉素组、叶酸组和金果胃康胶囊高、中及低剂量组，每组11只。空白组及模型组每日灌胃去离子水，金果胃康胶囊高、中、低剂量组给药浓度分别为1.8g/(kg·d)、0.9g/(kg·d)、0.45g/(kg·d)，3-MA组给药浓度为1.6mg/(kg·d)，雷帕霉素组给药浓度为2mg/(kg·d)，叶酸组给药浓度为2mg/(kg·d)，2ml/只/日，连续给药8周。于第24周末禁食16h后取材，HE染色光镜下观察各组胃黏膜病理学改变，采用qPCR技术检测miR-216b和beclin-1mRNA的表达，Westernblot技术检测beclin-1的蛋白表达，免疫荧光法检测Vps34、UVRAG、Atg14L、Ambra1及Bcl-2蛋白的表达，并比较各组间差异。
结果：1.HE染色观察：空白组黏膜上皮形成胃小凹，排列紧密、规则，固有腺体形态规则、分布均匀、极性好，间质未见淋巴细胞及中性粒细胞的浸润。模型组黏膜上皮结构紊乱，腺体减少、排列稀疏，可见杯状细胞、或异型的细胞，核染色质多而粗糙、重叠，局部腺管扩张，腺腔边界欠清晰，间质见少量炎性细胞的浸润。金果胃康高剂量组黏膜细胞形态均一、排列整齐，腺体分布均匀、极性较好，间质未见炎性细胞浸润。金果胃康中剂量组黏膜腺体减少，固有层内少有炎性细胞浸润。金果胃康低剂量组、3-MA组及叶酸组黏膜见异型的细胞，极性较差，核染色深或呈杆状，腺管扩张、分支，间质有少量炎性细胞的浸润。雷帕霉素组黏膜固有腺体内见杯状细胞，间质局部见少量炎性细胞浸润。
2.qPCR结果
①miR-216b的表达情况：空白组较PLGC模型大鼠各组均显著降低(P＜0.01，P＜0.05)。模型组miR-216b表达较3-MA组、金果胃康低剂量组升高不明显(P＞0.05)，较其余各组均显著升高(P＜0.01)。金果胃康各剂量组均能降低miR-216b的表达，尤以高剂量组明显。3-MA组miR-216b的表达水平最高，与除模型组外的其余各组差异显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组miR-216b的表达水平，较叶酸组、雷帕霉素组更低，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
②beclin-1mRNA的表达情况：空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01)。相较模型组，除3-MA组外的其余各组beclin-1mRNA表达均显著升高(P＜0.01)。金果胃康各剂量组的表达均升高，尤以高剂量组显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组beclin-1mRNA表达水平高于叶酸组、雷帕霉素组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.Westernblot结果
beclin-1蛋白的表达情况：即Beclin-1/β-actin灰度值的比值，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01)。相较模型组beclin-1的蛋白表达，3-MA组明显减小(P＜0.01)，金果胃康低剂量组增大不明显(P＞0.05)，其余各组均明显增大(P＜0.01)。金果胃康各剂量组中，高剂量组增大更显著(P＜0.01)。金果胃康高剂量组beclin-1的蛋白表达水平，高于叶酸组、雷帕霉素组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
4.免疫荧光结果
①Vps34蛋白的表达情况：Vps34蛋白荧光强度，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01,P＞0.05)。较模型组荧光强度，3-MA组减弱(P＜0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康各剂量组中，高剂量组较中、低剂量组荧光强度增强更显著(P＞0.05,P＜0.01)。金果胃康高、中剂量组与雷帕霉素组、叶酸组荧光强度的差异无统计学意义(P＞0.05)。
②UVRAG蛋白的表达情况：较空白组，其余各组UVRAG蛋白荧光强度均减弱(P＜0.01)，其中3-MA组最弱(P＜0.01)。较模型组荧光强度，金果胃康低剂量组增强不明显(P＞0.05)，3-MA组减弱明显(P＜0.01)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康高剂量组较金果胃康低、中剂量组及雷帕霉素组，荧光强度增强显著(P＜0.01，P＜0.05)。金果胃康高剂量组与叶酸组的荧光强度差异无统计学意义(P＞0.05)。
③Atg14L蛋白的表达情况：较空白组，其余各组Atg14L蛋白荧光强度均减弱(P＜0.01)。较模型组荧光强度，3-MA组减弱、金果胃康低剂量组增强的程度不明显(P＞0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01)。金果胃康高剂量组较中、低剂量组的荧光强度增强明显(P＜0.01，P＜0.05)，金果胃康高剂量组、叶酸组及雷帕霉素组荧光强度的差异无统计学意义(P＞0.05)。
④Ambra1蛋白的表达情况：Ambra1蛋白荧光强度，空白组最高(P＜0.01)，3-MA组最低(P＜0.01,P＜0.05)。较模型组荧光强度，3-MA组明显减弱(P＜0.05)，其余各组均明显增强(P＜0.01，P＜0.05)。金果胃康各剂量组中，高剂量组较中、低剂量组的荧光强度增强更显著(P＜0.01)。雷帕霉素组Ambra1蛋白荧光强度，较金果胃康高剂量组、叶酸组增强，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
⑤Bcl-2蛋白的表达情况：较空白组，其余各组Bcl-2蛋白荧光强度均显著增强(P＜0.01，P＜0.05)，其中3-MA组的荧光强度最强(P＜0.01)。较模型组，3-MA组(P＜0.01)及金果胃康低剂量组(P＞0.05)的荧光强度增强，其余各组强度均减弱(P＜0.01)。金果胃康高、中剂量组的荧光强度低于低剂量组(P＜0.01)，金果胃康高剂量组较叶酸组、雷帕霉素组的荧光强度弱，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：
1.本研究采用MNNG(150ug/ml)负荷乙醇(45%)、雷尼替丁(0.03g/kg)及饥饱失常的综合造模法，连续造模16周后，经病理结果证实成功制备了PLGC大鼠模型。
2.金果胃康胶囊对PLGC大鼠的一般情况，及胃黏膜萎缩、肠化及异型增生病理改变，有明显的改善作用，尤以高剂量组显著。
3.金果胃康胶囊可以抑制PLGC大鼠miR-216b的过表达，促进beclin-1在转录与翻译水平的阳性表达；上调beclin-1复合体中Vps34、UVRAG、Atg14L、Ambra1蛋白的表达，下调Bcl-2蛋白的表达。提示金果胃康胶囊可能通过抑制miR-216b对beclin-1mRNA的负调控，激活beclin-1的表达，同时调节beclin-1复合体中各蛋白的表达失常，即通过调控miR-216b/beclin-1信号通路，促进细胞自噬，从而发挥胃黏膜保护作用，高剂量组的疗效相对最佳。