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本课题以Eca109细胞为研究对象,应用现代医学的实验技术,重点观察了豆根管食通口服液对人食管癌细胞生长抑制及食管癌多药耐药基因糖蛋白P-170的影响,从细胞分子水平探讨该药的作用机制,为临床应用该药提供科学的理论依据。
本实验选取体外培养的Eca109细胞,先进行分组,除空白对照组外,各组分别加入不同药物(n=20)。抑瘤实验分组如下:①单药实验组(25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml);②阳性对照组;③联合用药组;④空白对照组。实验结束后分别计算各组抑瘤率,为下一步实验做参考。第二步,分组检测P-170。①单药实验组:豆根管食通口服液终浓度为含生药25mg/ml、200mg/ml;②空白对照组;③联合用药组;④单用5-Fu组:5-Fu终浓度为100μg/ml。用免疫组化S-P法检测各组细胞多药耐药基因糖蛋白P-170的表达。
结果显示:在生长抑制率方面,①单用豆根管食通各浓度组、联合用药组以及单用5-Fu均有明显的抑瘤作用;②单用豆根管食通100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml组抑瘤率优于单用5-Fu组,P<0.05;但单用豆根管食通25mg/ml、50mg/ml组不优于单用5-Fu组P>0.05;③50mg/ml豆根管食通联合25μg/ml5-Fu组不优于25mg/ml豆根管食通联合25μg/ml5-Fu组,P>0.05。在对细胞膜糖蛋白P-170的表达的影响上,①单用高浓度豆根管食通以及联合5-fu均较空白对照组明显,P<0.05;②高浓度豆根管食通联合5-fu较低浓度联合5-fu差异明显,P<0.05;③低浓度豆根管食通以及联合5-fu较空白对照组及低浓度联合用药组,其表达均无明显差异。
结论:豆根管食通口服液在体外具有明显抑制Eca109细胞的作用,与药物浓度呈正相关;在影响多药耐药基因糖蛋白P-170的表达上,高浓度组细胞膜染色的百分率下降,特别是对化疗药作用过的食管癌细胞,可以进一步降低其P-170的表达。说明豆根管食通口服液的抑瘤机理,即它的抗癌作用一部分是通过有效降低P-170的表达来实现的。