论文部分内容阅读
研究背景：酒精性肝损伤(Alcoholic liver disease, ALD)是因长期大量摄入酒精而造成的肝脏损伤疾病。随着酒精摄入量的增加,该疾病呈渐进性发展,可从最初的酒精性脂肪肝发展为酒精性肝炎、酒精性肝纤维化及酒精性肝硬化。随着现代生活水平的提高和饮食结构的变化,人们社交应酬增多以及生存竞争压力增大,酗酒和酒精中毒呈日益增多趋势。在欧美发达国家,它是位列心血管病、肿瘤之后占第三位的公共卫生问题,其发病形式主要以洒精性脂肪肝为主；在中国,随着我国总体实力的日益提高,酒精性疾病的发生率也与日俱增,主要以酒精性肝炎为主。日前对于酒精性疾病的治疗,临床一般采取戒酒和药物综合干预的,但患者对戒洒的依从性较差,而药物治疗的疗效又争议颇多。中医自古就提倡未病先防、既病防变的治疗原则,中医药在解洒保肝方面亦有先天优势,在古代文献记载中,葛花枳椇子是最具有代表性的解酒药对,葛花功用为解酒醒脾,枳棋子具有清热利尿,解洒毒的功效,葛花与枳棋子相配，上下分消,使邪有去路,酒毒之邪既能从表而发散，又能从小便而解,两药作用相得益彰,大大增强解酒的功效。实验组前期通过借助现代科学技术方法与手段,进行了葛花和枳椇子不同比例配伍(1：1、1：2、和2：1),不同的提取方法(水提和醇提)对大鼠慢性酒精性肝损伤的防治研究,结果表明传统水提的效果优于醇提,并且葛花枳棋子2：1比例配伍解酒保肝效果最佳。研究目的：本实验以慢性酒精性肝损伤为研究对象,从配伍剂量和给药周期两个角度,探讨葛花枳棋子配伍的量-时-效关系,阐明葛花枳棋子最佳配伍条件,以期为临床医师应用葛花枳棋子防治慢性酒精性肝损伤提供借鉴,为阐明葛花枳棋子解酒保肝的作用机制提供依据。研究方法：大鼠适应性喂养一周后,按体重随机分为6组：空白组、模型组、东宝甘泰组、配伍低剂量、配伍中剂量、配伍高剂量。采用56。红星二锅头灌胃的方法建立大鼠酒精性肝损伤模型,分别于实验第4周、第8周、第12周末,每组随机选取8只大鼠禁食不禁水12小时,10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,将全血一部分注入空白洁净试管内,一部分注入装有肝素钠的洁净试管内,离心分离血清和血浆,-70。冻存待检。取血后,迅速剖腹取肝,称肝重后先取肝大叶一块组织装入病理固定液中,用于观察病理组织学变化,然后将剩余的肝组织分成若干小块,分装入冻存管中,液氮冻存,-70。冻存待检。研究内容：研究内容分为两个方面：(1)葛花枳椇子配伍防治慢性酒精性肝损伤的量-时-效关系的研究。采用白酒灌胃的方法复制慢性酒精性肝损伤模型,给予实验动物不同的药物剂量,不同服药疗程,通过检测血中乙醇浓度、乙醇脱氢酶活性、肝指数、血清肝功能相关指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)以及肝脏病理组织形态方面的变化,观察葛花、枳棋子配伍防治慢性酒精性肝损伤的量-时-效关系。(2)葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠“内毒素-Kupffer细胞-TNFα-肝脏炎症-肝细胞凋亡”途径的影响。研究表明,内毒素及其激活肝Kupffer细胞产生炎症因子是酒精性肝损伤的重要机制。本实验拟通过检测“酒精-内毒素-Kupffer细胞-TNFα-肝脏炎症-肝细胞凋亡”的途径中各细胞因子(包括内毒素、TNFα、IL-1、IL-6、INF-γ等)的变化以及酒精所致肝细胞凋亡的变化,揭示葛花枳棋子配伍在内毒素-肝脏炎症-细胞凋亡方面的保肝作用机制。研究结果：①葛花枳椇子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏指数的影响在白酒灌胃8周末和12周末,葛花枳椇子配伍低剂量组的肝脏指数降低,与模型组比较有统计学差异；葛花枳棋子配伍中剂量组和高剂量组第12周末的肝脏指数显著降低,与模型组比较有统计学差异。②葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠血清AST、ALT、ALP、TP、ALB的影响在白酒灌胃4周末、8周末和12周末,模型组动物血清中AST、ALT均升高,其中8周末和12周末与空白组比较,有显著性差异,同时也说明8周末时已经造模成功；在降低血中ALT含量方面,第8周开始模型组与空白组具有统计学差异,由此说明第8周模型成功；给药第12周,葛花枳椇子配伍不同剂量组TP升高,仅配伍低剂量组有统计学差异；给药第12周,葛花枳棋子配伍不同剂量组ALB升高,有统计学差异。③葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠血中乙醇浓度和ADH活性的影响在白酒灌胃8周末和12周末,葛花枳棋子各剂量配伍组均可明显降低血中乙醇浓度,且至12周末,配伍低剂量组血中乙醇浓度最低；8周末和12周末配伍低剂量组肝中ADH活性增强,与模型组比较具有显著性差异。④葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠血清ET-1、IL-1、IL-6、TNFα、INF-γ的影响在白酒灌胃4周末、8周末和12周末,葛花枳棋子2：1比例配伍的高中低剂量组在改善酒精所导致的“内毒素-Kupffer细胞-TNFα-肝脏炎症”途径中各细胞因子包括内毒素、TNF α、IL-1、IL-6、INF-γ等方面具有一定趋势,但这种改善的趋势不是很明显。⑤葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠肝中Caspase-3含量的影响在白酒灌胃12周末,葛花枳椇子配伍高剂量组较空白组大鼠肝中caspase-3浓度降低,结合大鼠血清中炎症因子TNF-α的含量也较模型组有降低的趋势,表明高剂量组对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织Caspase-3活性具有一定的抑制作用。⑥葛花枳棋子配伍对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织形态学的影响在白酒灌胃8周末和12周末,模型组大部分动物出现炎症细胞浸润,脂肪空泡及坏死,显示酒精性肝损伤模型复制成功,葛花枳棋子配伍各剂量组大鼠在病理上较模型组有一定的改善作用。其中12周,低剂量配伍组和中剂量配伍的病变改善比高剂量组稍佳。研究结论：从本研究所检测的药效指标综合分析可以看出,在时间方面,给药8周和12周,配伍各剂量组分别有一定的治疗作用,可以不同程度地改善相关异常指标,尤其在直接反应酒精性肝损伤的指标方面如：改善肝脏功能相关指标方面AST.ALT.ALP. TP.ALB和病理方面低剂量组较中高剂量组效果好；第8周和第12周,在反映实验动物酒精代谢相关指标如ADH活性和血中乙醇浓度方面,配伍低剂量组显示出药效最优。②在反映酒精性肝损伤相关机制指标方面,在造模给药的第4周、第8周和第12周,葛花枳棋子配伍高剂量组较空白组大鼠肝中Caspase-3浓度降低,对Caspase-3活性具有一定的抑制作用,对于改善酒精导致的“内毒素-Kupffer细胞-TNF α-肝脏炎症”途径中各细胞因子包括内毒素、TNF α、IL-1、IL-6、INF-γ等方面具有一定趋势,但这种改善的趋势不是很明显,由此推断葛花枳棋子2：1比例配伍的高中低剂量组可能通过其它途径达到保护肝细胞,减轻酒精导致的肝损伤。