【摘 要】
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本文从海洋细菌中筛选得到一株高产蛋白酶的芽胞杆菌（Bacillus sp.）。通过鸟枪法构建基因组文库，首次从该细菌中克隆得到一个具有纤溶酶活性的丝氨酸蛋白酶基因BVSP，全长963碱基，
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本文从海洋细菌中筛选得到一株高产蛋白酶的芽胞杆菌（Bacillus sp.）。通过鸟枪法构建基因组文库，首次从该细菌中克隆得到一个具有纤溶酶活性的丝氨酸蛋白酶基因BVSP，全长963碱基，编码320个氨基酸，软件预测及SDS-PAGE分析验证其大小为35kDa，将其命名为BVSP。同源比对显示该酶隶属于丝氨酸蛋白酶家族，与其他已经报道生化特性的蛋白酶氨基酸一致性最高为59％，说明它是一个新型丝氨酸蛋白酶。SignalP软件预测显示该基因不存在信号肽，表明它是一个胞内丝氨酸蛋白酶。与多数报道的蛋白酶是以无活性的包涵体形式表达不同，其在宿主E.coli BL21（DE3）中能够以可溶蛋白形式表达。利用GST亲和纯化系统纯化及研究分析其酶学性质，结果表明该酶以1%的酪蛋白溶液为底物时，在pH6.5和54℃条件下表现出最高活性（5100U/mg）。另外，30mmol/L Ca2+和Sr2+都对其有强烈激活作用，活性分别提高到13.8倍和13.9倍，Ba2+为3.1倍，Hg2+则完全抑制其活性；该酶能够被丝氨酸蛋白酶专一性不可逆抑制剂PMSF（苯甲基磺酰氟）和AEBSF(4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐)完全抑制，说明BVSP是一个丝氨酸蛋白酶；在5%（m/v）的尿素和盐酸胍条件下分别能够保持最高活性的75%和61%，表明了其在工业应用中的潜能。该酶同时还具有较高的纤溶酶活性（3863U/mg）,能够直接降解交联蛋白，表明其在心血管疾病的预防及治疗方面的应用潜能。
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