补肾活血方及其拆方对控制性超促排卵小鼠妊娠黄体血管生成的影响

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目的:  探讨补肾活血方及其拆方对控制性超促排卵小鼠孕早期妊娠黄体血管生成相关因子HIF-1α、PDGF-B及VEGF-A的影响.  方法:  将雌性昆明小鼠150只随机均分成5组:正常组(N)、COH模型组(M)、补肾组(BS)、活血组(HX)以及补肾活血组(BH).采用腹腔注射7.5IU注射用孕马血清促性腺激素(PMSG),48小时后腹腔注射7.5IU注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG)建立控制性超促排卵小鼠模型,注射HCG后将雌性小鼠与雄性小鼠以1∶1比例合笼,正常组雌鼠于相应时间段给予0.5mL生理盐水腹腔注射并合笼.于次日早晨8点观察雌鼠阴道,发现阴栓者即为妊娠第一天.于妊娠第一天起,每天早晨9点正常组与模型组给予生理盐水0.3mL灌胃,各中药组分别给予相应中药0.3mL灌胃,直至处死当天.分别于妊娠第5、6及8天处死小鼠,留取标本.采用HE染色法观察卵巢组织病理学改变及黄体计数,免疫组织化学法观察卵巢中HIF-1α、PDGF-B及VEGF-A蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测卵巢中HIF-1α、PDGF-B及VEGF-A mRNA表达水平.  结果:  1.HE染色及妊娠黄体计数:与正常组相比,模型组妊娠第5、6、8天的卵巢体积均增大;与模型组相比,各药物组卵巢体积明显缩小,且趋近于正常组卵巢体积.模型组妊娠黄体数较正常组增加,差异有统计学意义(P<0.05),各药物组与模型组无明显差异  2.免疫组化:VEGF-A、HIF-1α、PDGF-B在妊娠黄体中均主要表达于颗粒细胞中,与正常组相比,模型组各组表达较密集;与模型组相比,中药各组表达较疏松.  3.实时荧光定量RCR结果显示:正常组妊娠第5、6、8天卵巢中,VEGF-A、HIF-1α、PDGF-B mRNA表达均呈上升趋势,而模型组均呈下降趋势.与正常组相比,模型组VEGF-A mRNA在妊娠第5、6天均显著升高(P<0.05,0.05);与模型组相比,补肾组、活血组及补肾活血组在妊娠第5天有显著性差异(P<0.05,0.05,0.05);补肾组与补肾活血组在妊娠第6天有显著性差异(P<0.05,0.05).与正常组相比,模型组HIF-1αmRNA在妊娠第5、6天均显著升高(P<0.05,0.05);与模型组相比,补肾组、活血组及补肾活血组在妊娠第5天有显著性差异(P<0.05,0.05,0.05);补肾组与补肾活血组在妊娠第6天有显著性差异(P<0.05,0.05);补肾组在妊娠第8天有显著性差异(P<0.05).与正常组相比,模型组PDGF-B mRNA在妊娠第5显著升高(P<0.05),在妊娠第8天显著下降(P<0.05);与模型组相比,补肾活血组在妊娠第5天有显著性差异(P<0.05);补肾组、活血组及补肾活血组在妊娠第8天有显著性差异(P<0.05,0.05,0.05).  结论:  补肾活血方及其拆方可通过调节COH模型中HIF-1α、PDGF-B及VEGF-A的表达进而改善妊娠黄体的血管生成,促进妊娠的成功发生.
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