论文部分内容阅读
目的:探讨积雪草酸(Asiatic acid,AA)对小鼠心肌缺血损伤的保护作用及其机制。方法:雄性C57BL/6小鼠,水合氯醛30 mg/kg腹腔麻醉。开胸结扎左前降支(Left anterior descending,LAD)建立小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型。小鼠随机分为五组:①A组:假手术组(Sham组);②B组:模型组(MI组);③C组:AA低剂量组[25mg/(kg.d)];④D组:AA中剂量组[50 mg/(kg·d)];⑤ E 组:AA 高剂量组[100 mg/(kg·d)]。Sham 组仅穿线,不结扎LAD。各组均于术后灌胃给药两周,Sham组及MI组给予等体积生理盐水。两周后,超声心动图检测小鼠左室结构及功能变化;伊文氏蓝和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyl-2H-tetrazolium chloride,TTC)联合染色法检测心肌梗死面积;脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-Mediated dUTP-biotin nick end Labeling,TUNEL)检测心肌组织中的细胞凋亡;苏木精-伊红(hematoxylin eosin staining,HE)染色法观察心肌组织病理损伤程度;试剂盒检测血清中乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测心肌组织中p-p38、p38蛋白的表达。结果:1.AA改善心肌缺血后小鼠的心脏功能MI术后2周,模型组小鼠与假手术组相比左室收缩末期内径(Left ventricular end-systolic diameter,LVESD)、左室舒张末期内径(Left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)显著增大(4.78 ± 0.67 vs 2.57 ± 0.31 mm;5.77 ± 0.59 vs 3.93 ±0.24mm,P<0.05),左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(Left ventricular fractional shortening,LVFS)则显著减少(32.8 ± 2.97 vs 63.5 ± 3.11%;24.1 ± 2.77 vs 43.1 ± 2.94%,P<0.05)。而各用药组与模型组相比较,AA25mg/(kg ·d)组,LVESD(4.42±0.58vs4.78±0.67mm)、LVEDD(5.55±0.41vs 5.77±0.59mm)有下降趋势,但无统计学意义。AA50mg/(kg·d)组及 100 mg/(kg d)组,LVESD 分别为(4.06±0.45)mm、(3.38 ±0.69)mm,LVEDD 分别为(5.10±0.57)mm、(4.54±0.62)mm,均显著小于模型组(4.78±0.67mm;5.77±0.59mm,P<0.05),且 AA 中、高剂量组 LVEF 分别为(40.7 ±2.45)%、(48.6 ±2.13)%,LVFS 分别为(32.6 ±2.33)%、(37.7±2.54)%,均显著大于模型组(32.8 ±2.97%;24.1 ±2.77%,P<0.05)。2.AA改善心肌缺血后小鼠MI面积伊文氏蓝/TTC双染色结果显示:模型组MI面积显著高于假手术组(P<0.05),可达(34.3 ±3.22)%,证明缺血后会对心肌造成损伤。而与模型组相比,AA低、中、高剂量组MI面积均有降低,其中中、高剂量组效果显著(P<0.05),MI 面积分别为(27.4±1.95)%、(20.6±2.33)%;而低剂量组 MI面积虽有降低,为(30.1 ±3.53)%,但与模型组相比,无显著性差异。3.AA改善心肌缺血小鼠心肌细胞凋亡水平TUNEL检测结果显示:假手术组凋亡细胞较少,凋亡率仅为(5 ±0.80)%,而模型组则出现较多的凋亡细胞,凋亡率高达(42.8 ± 5.54)%,两组相比,P<0.05。而与模型组相比,AA中、高剂量组凋亡细胞显著减少(P<0.05),凋亡率分别为(35.1 ±5.15)%和(28.6±3.98)%。而低剂量组与模型组相比尽管细胞凋亡率有所下降(39.2± 4.64 vs 42.8 ±5.54)%,但无显著性差异。4.AA改善心肌缺血后小鼠心肌组织结构的破坏HE染色结果显示:与假手术组相比,模型组心肌细胞坏死及纤维化区较多,且心肌细胞排列紊乱、肥大;而AA中、高剂量组的心肌细胞排列较整齐,细胞坏死及纤维化区面积减小。5.AA对心肌缺血后小鼠心肌损伤的保护作用LDH及CK-MB检测结果显示:模型组LDH及CK-MB水平与假手术组相比显著升高(P<0.05),(5874± 110.7 vs 1634 ±123.3 U/L;1497 ±176.6 vs 322.1±127.1U/L)。而AA低、中、高剂量组LDH及CK-MB水平与模型组相比均显著降低(P<0.05)。6.AA改善心肌缺血后小鼠的SOD水平及MDA含量MI术后,模型组与假手术组相比血清SOD水平显著下降(215 ± 59.1 vs 324± 62.2 kU/L,P<0.05),MDA 含量显著升高(6.72± 0.48 vs4.41± 0.31 μmol/L,P<0.05)。AA各剂量组与模型组相比SOD水平均有升高,但仅高剂量组SOD水平差异有统计学意义。而AA中、高剂量组MDA含量与模型组相比均显著降低(P<0.05)。7.AA降低p-p38蛋白表达水平Western blot检测结果显示:MI术后2周,模型组p-p38蛋白表达水平与假手术组相比显著增高(P<0.05)。AA各剂量组p-p38蛋白表达水平与模型组相比,均有所降低;同时,结果显示,AA各剂量组降低蛋白表达水平作用呈剂量相关性。结论:积雪草酸对心肌缺血所致小鼠心功能损伤具有一定的保护作用,可减少缺血后的心肌梗死面积、减轻心肌细胞凋亡,并改善缺血后的心肌组织结构的破坏。积雪草酸的保护作用机制可能与降低小鼠心肌缺血所致的氧化应激水平及相关信号转导通路中p-p38的过表达有关。