【摘 要】
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急性心肌梗死(Acute myocardial infarction AMI)早期的心电图变化既不特异也不敏感,临床上已渐渐依靠心肌组织损伤的生化标志物作为早期诊断的指标.建立免疫测定方法,获得高
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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急性心肌梗死(Acute myocardial infarction AMI)早期的心电图变化既不特异也不敏感,临床上已渐渐依靠心肌组织损伤的生化标志物作为早期诊断的指标.建立免疫测定方法,获得高纯度抗原是首要的和必须的问题.以往国内外获取cTnT与cTnI蛋白多采用从心肌提取的方法,这些方法较为繁琐,且得到的大多为肌钙蛋白复合物形式.分子生物学的进展,使人们通过基因重组的方法大量获取目的蛋白成为可能.近年来,国内外有人尝试用基因重组的方法表达cTnT与cTnI,但存在一些问题诸如cTnT表达量偏低,cTnI的稳定性不够高.该文拟通过同义替换cTnT基因上的稀有密码子,选取cTnI蛋白的稳定区段对应的基因,在E.Coli中表达相应的融合蛋白,观察其表达量、免疫活性及其稳定性.第一部分,成人心肌肌钙蛋白TnT的基因有288个密码子,对E.coli来说有14个编码精氨酸的稀有密码子,其中有12个AGG和2个AGA密码子,所占比例为4.9％.第二部分,不同的cTnI分子片段有不同的稳定性,对蛋白水解酶耐受力最强的片段是cTnI的第28-110位氨基酸序列.这给我们提供了一条线索,通过基因重组表达cTnI的第28-110位氨基酸,但是有文献报道仅仅重组表达该片段,稳定性提高并不明显.总之,cTnT基因上的两对稀有密码子的同义替换,可提高其在E.Coli中的表达量;选取cTnI耐受蛋白酶降解的基因区段,作GST融合蛋白表达,可改善其稳定性.该文对cTnT与cTnI所作的GST融合表达的研究,目前国内外尚未见报道.稳定性较好的GST-TnI(28-110aa)融合蛋白有可能作为人血清cTnI测定的参考标准品.这些研究为建立相应的免疫测定提供了坚实的物质基础.
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