水稻种子中EPA和DHA合成途径的创建初探

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二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)属于ω-3系列超长链多不饱和脂肪酸(VLCPUFA)。EPA和DHA作为哺乳动物必需的超长链多不饱和脂肪酸,在其生长、发育过程中至关重要。但是,EPA和DHA在机体中的含量非常低,需要通过饮食补充,因而,EPA和DHA已经成为功能食品和医药等领域研究的热点。目前,人类主要从深海鱼油中获得EPA和DHA,但是由于近年来可利用的海洋鱼类资源日渐缺乏,海洋食品的安全问题渐渐凸显,依靠海洋资源已经无法满足不断增长的市场需求。所以,找寻稳定可持续的超长链多不饱和脂肪酸的新来源十分迫切。  水稻中不存在VLCPUFA的生物合成途径,本研究的主要目的是通过构建多价植物表达载体,将6个VLCPUFA合成涉及的基因分为两部分构建到植物表达载体上,并转入水稻中。然后将获得的转基因阳性植株杂交,使多基因聚合,使水稻具备合成ω-3VLCPUFA的途径。  基于以上的目的,首先,通过文献检索获得由ALA合成DHA合成相关的5个基因的序列。为了使这些基因在水稻中正常表达,依据水稻密码子偏好性进行了优化,然后人工合成这5个基因的开放阅读框。将这些基因连同水稻内源的OsFAD3与水稻谷蛋白的启动子、终止子组合好,构建到基因植物表达载体pCAMBIA1301上并导入水稻中。通过PCR鉴定,共获得独立的转基因植株436株。Southern杂交的结果显示,这些基因以不同的拷贝数插入到水稻基因组中。随后通过RT-PCR检测发现显示△6延伸酶基因、△5脱氢酶基因、△5延伸酶基因和△4脱氢酶基因成功转录,但是△6脱氢酶基因没有表达。  由于个别基因没有正常转录,所以,本研究最终未继续将两部分转基因材料杂交,未能获得合成EPA和DHA的转基因植株。尽管如此,本研究对未来进行DHA合成通路在水稻中的建立具有一定的参考意义。
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