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目的:为了揭示miRNA与甲状腺乳头状癌(PaPillary thyroid cancer,PTC)的关系,本课题以PTC组织样本为研究对象,测序筛选差异miRNA,并从分子层面验证黄芪多糖(astragalus Polysaccharide,APS)抗PTC的机制。方法:(1)PTC表达谱的构建与分析选取甘肃省人民医院普通外科经病理确诊的PTC癌组织及配对正常组织样本3对,运用转录组测序技术进行分析,筛选显著差异表达的miRNAs,预测靶基因并进行通路富集分析,在细胞层面对筛选的差异基因进行验证。(2)APS干预TPC-1细胞形态的观察APS干预TPC-1细胞后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化情况。(3)APS对TPC-1增殖的影响取生长状态良好的TPC-1细胞,接种于96孔板中,利用CCK8分别对TPC-1对照组、APS100ug/mL、APS200ug/mL、APS400ug/mL作用12h/24h/36h/48h后,绘制各组细胞的抑制率。(4)novel-miR-26、FOXO1水平的检测分别收集不同浓度APS(100、200和400ug/mL)处理的TPC-1细胞和对照组细胞,提取RNA,检测各组细胞novel-miR-26及其靶基因FOXO1mRNA的表达,提取蛋白检测FOXO1的表达。结果:(1)所有样品共得到2036个miRNA,其中已知miRNA 1591个,新发现miRNA445个;发现1166个miRNA差异表达,其中上调表达446个,下调表达720个;深度分析发现hsa-miR-124、hsa-miR-7低表达,hsa-miR-106a-3P、hsa-miR-494、novel-miR-26高表达。(2)GO分析结果显示:BP(生物过程)主要集中在生物粘附、生物调节、细胞成分等方面;CC(细胞组分)主要集中在细胞连接、大分子复合物、细胞器等方面;MF(分子功能)主要集中在粘连、转录因子活性、分子活动等方面;极显著的KEGG通路是轴突导向、AMPK、蛋白代谢信号转导通路,轴突导向等相关信号通路可能影响细胞迁移,细胞周期的变化可能是靶基因参与AMPK等信号通路的调节导致,氨基酸代谢、昼夜节律、蛋白消化吸收等信号通路对肿瘤细胞的凋亡发挥相应的作用。(3)novel-miR-26在TPC-1细胞进行验证,实验结果与miRNA-Seq测序结果高度一致。(4)APS(100、200、400ug/mL)组干预TPC-1细胞24小时后与对照组比较,形态观察发现干预组细胞密度均比TPC-1的密度稀疏,在各个组稀疏程度也不相同,发现加入APS的组中,细胞生长变缓,贴壁不稳,细胞之间的间隙改变,会发现漂浮的死细胞较多。APS(100ug/mL、200ug/mL、400ug/mL)组干预TPC-1细胞24小时后与对照组比较,APS对TPC-1细胞增殖具有抑制作用,时间—浓度具有相关性,CCK8结果显示APS100组、APS200组及APS400组在四个不同时间段增殖抑制率均显著高于对照组(P<0.05);APS200组在四个不同时间段细胞增殖抑制率均显著高于APS100和APS400组(P<0.05),APS对TPC-1增殖抑制率表现为浓度200ug/mL时抑制最佳;APS作用24h,细胞抑制率均高于12h/36h/48h,差异有统计学意义(P<0.05),APS对TPC-1增殖抑制率表现为24h时抑制最佳。(5)与对照组比较,APS可以抑制novel-miR-26的表达(P<0.05)且浓度为200ug/mL抑制最佳(P<0.05)。(6)FOXO1mRNA及蛋白检测结果显示,不同浓度的APS组均能促进FOXO1表达(P<0.05)。结论:(1)测序发现hsa-miR-124、hsa-miR-7,hsa-miR-106a-3P、hsa-miR-494、novel-miR-26与PTC的发生具有相关性;其靶基因参与细胞周期、细胞迁移、细胞凋亡,与AMPK、轴突指导、氨基酸代谢等信号通路的激活关系密切。(2)黄芪多糖对TPC-1细胞的增殖具有抑制作用,增殖抑制率表现为24小时,浓度200ug/mL时效果最佳;(3)黄芪多糖对甲状腺乳头状癌的干预机制可能是通过抑制novel-miR-26并促使靶基因FOXO1高表达,与FOXO信号的激活有关。