论文部分内容阅读
目的: 本文系统研究忍冬科锦带花属植物水马桑 Weigela japonica Thunb. var. sinica (Rehd.) Bailey乙酸乙酯(EtOAc)萃取部位的化学成分；评价醇提物和各极性部位以及乙酸乙酯部位所得两种主要单体化合物的体外抗肿瘤活性，为其有效活性成分的筛选奠定理论基础。拟定水马桑的质量标准，为该药材的质量控制以及开发和利用提供有效依据。 方法: （1）先用95%的乙醇对水马桑根化学成分进行提取，再对醇提物依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取，得到各极性部位浸膏。将所得乙酸乙酯部位浸膏采用正相硅胶、葡聚糖凝胶等柱色谱以及制备高效液相色谱法等分离技术，同时用TLC和HPLC进行跟踪，分离纯化单体化合物，然后利用现代波谱学技术(1H-NMR、13C-NMR)并结合相关文献资料对分离所得单体化合物进行结构的鉴定。 （2）采用MTT法，评价水马桑醇提物和不同萃取部位对不同肿瘤细胞的体外抗增殖活性，确定其有效活性部位，进而对该部位进行活性追踪，检测其有效抗肿瘤活性成分。 （3）按药材质量标准制定的基本方法进行水马桑的质量标准研究，其研究项目主要包括鉴别项：性状、显微和薄层色谱的鉴别；检查项：水分、灰分和浸出物的含有量测定；含量测定项：以东莨菪内酯为对照品，采用HPLC和UV法分别测定了水马桑中东莨菪内酯、总香豆素的含量。 结果: （1）从水马桑根乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离获得了5个香豆素类化合物，分别鉴定为: 东莨菪内酯、臭矢菜素B、秦皮素、秦皮苷和东莨菪苷。 （2）水马桑提取物对癌细胞具有选择性，各萃取部位对本实验所筛选的人子宫内膜癌细胞株RL95-2、小鼠宫颈癌U14细胞均表现细胞毒作用，其中石油醚部位和乙酸乙酯部位活性较好，对RL95-2细胞的IC50值分别为65.55和77.11μg·mL-1。对胃癌HGC-27细胞，只有乙酸乙酯部位表现有良好活性，且具浓度依赖性，其IC50值为84.03μg·mL-1。而单体化合物东莨菪内酯和秦皮素并非是通过细胞毒作用而发挥抗胃癌细胞增殖作用。但秦皮素对小鼠宫颈癌U14细胞表现有细胞毒性，且随药物浓度的增大和作用时间的延长抑制该细胞增殖的作用增强。 （3）水马桑具典型性状特征；粉末显微鉴别显示其主要特征为纤维、石细胞、油室、常见的具缘纹孔导管以及由草酸钙方晶形成的晶纤维等；10 批水马桑的TLC显示其斑点清晰，无其余杂质斑点的干扰，分离度良好，且和对照品斑点有同一Rf值。拟定水马桑的水分、总灰分和酸不溶性灰分的含有量分别不得过12.0%、2.0%和0.5%，水溶性和醇溶性浸出物得含有量分别不得低于 5.0%和 4.5%。东莨菪内酯浓度在1.25~40.0μg/mL（r=0.9997）、总香豆素含量在2.0～64.0μg/mL（r＝0.9999）范围内线性关系均良好，平均加样回收率分别为 98.50%（ RSD=0.6%）、98.08%（RSD=1.06%）。 结论: （1）从水马桑根中分离鉴定了5个化合物，且均属于香豆素类化合物，分别为东莨菪内酯和东莨菪苷、臭矢菜素B、秦皮素以及秦皮苷，以上化合物均为首次从该植物中分离发现。 （2）水马桑乙酸乙酯部位可抑制人子宫内膜癌RL95-2和人胃癌HGC-27细胞的增殖，其IC50值分别为77.11和84.03μg·mL-1，同时对小鼠宫颈癌U14细胞也有抑制活性。从乙酸乙酯部位获得的单体化合物秦皮素可抑制U14细胞增殖。 （3）研究拟定了水马桑的药材质量标准（草案）。该标准拟收载于《湖北省中药材质量标准》2018年版。从而为该药材的质量控制和合理使用提供了法定依据。