【摘 要】
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目前霍乱的流行主要是由O1群霍乱弧菌E1 Tor生物型(EVC)引起.应用噬菌体生物分型方法能将EVC区分为流行株和非流行株.用于E1 Tor霍乱弧菌分型的噬菌体有5个,分别是VP1、VP2、
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目前霍乱的流行主要是由O1群霍乱弧菌E1 Tor生物型(EVC)引起.应用噬菌体生物分型方法能将EVC区分为流行株和非流行株.用于E1 Tor霍乱弧菌分型的噬菌体有5个,分别是VP1、VP2、VP3、VP4、和VP5.本研究采用鸟松法随机测序和引物步行法相结合的原则对分型噬菌体VP4全基因组序列进行了测定.经过序列组装、拼接和验证,得到全长39491 bp的霍乱弧菌分型噬菌体VP4基因组序列.噬菌体VP4全基因组为环状双链DNA,G+C含量为42.6％.VP4的全序列与其它的已知噬菌体及微生物在整体上基本不同源性,生物信息学分析预测噬菌体VP4基因组编码49个开放读框(ORF),编码的多肽大小范围为32~1125aa.大多数ORF起始密码子为AUG,少数使用GUG和UUG.噬菌体基因组中基因排列体现了经济原则,前一个基因终止密码子与后一个基因的起始密码子重叠是VP4噬菌体基因组中比较常见的现象.基因转录主要是成簇转录,预测分为三个区域进行,均为顺时针转录.早期转录区、DNA复制的蛋白区和噬菌体成熟区.早期转录区包含克服宿区主限制的蛋白质、RNA聚合酶和未知蛋白.DNA复制蛋白区包含:DNA连接酶、内切核酸酶、深菌酶、解旋酶、引发酶、DNA聚合酶、外切核酸酶.连预测出的10个启动子区,利用报道基因质料转化策略分析了这些推测启动子的活性,将选出的启动子区分别克隆到启动子探测IacZ融合质料载体pRS1274,在转化于大肠埃希氏菌受体菌株JM109中时,克隆子均呈现兰斑,提示克隆的区域具有启动子活性,可为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别.
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