骨髓间质干细胞对急性肝损伤修复作用的研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:guohl_sh
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目的探讨人骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外特定条件下是否可以转化为肝细胞样细胞;建立小鼠急性肝损伤模型,评价经肝脏定点注射的人MSCs对小鼠急性肝损伤的治疗效果及初步探讨其可能机制。方法分离培养人骨髓间质干细胞,采用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)及损伤小鼠肝脏共培养等诱导方式,在不同时间点分别用RT-PCR和荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因的表达,免疫组织化学染色检测肝细胞标志;昆明白小鼠经10%的四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)腹内注射建立小鼠急性肝损伤模型,经由肝脏定点注射输入人骨髓间质干细胞,使用RT-PCR来定位小鼠肝脏中的人源性MSCs并检测人肝脏特异性基因,采集小鼠尾静脉血和肝脏组织标本,检测细胞输注后血清肝功能指标,观察组织病理学变化,评价MSCs的治疗效果并找寻修复肝损伤的机制。结果在HGF和bFGF诱导第7天时甲种胎儿蛋白(alpha fetalprotein,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin-18,CK18)和色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO)基因表达阳性,CK18和TDO的表达随诱导时间延长增高;第7天诱导细胞组织化学染色AFP、白蛋白(albumin,ALB)、肝细胞核因子(hepatocyte nuclearfactor,HNF)、肝细胞特异性抗原(HAS)和CK-18表达阳性。与损伤小鼠组织共培养后MSCs形态由长梭形变为圆形,21天后细胞表达AFP和TDO;成功建立小鼠急性肝损伤模型,利用人MSCs进行的定位实验中,在实验小鼠不同肝组织部位以及其他组织如心、肾、肺、脾扩增出人17α卫星DNA序列。MSCs实验组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)下降水平较对照组具有明显的差异(P<0.05)。实验组小鼠肝脏恢复情况较对照组有明显改善。并且在实验组小鼠肝脏中可检测到人肝特异性基因AFP和TDO的表达。结论HGF和bFGF联合诱导以及与CCl4损伤肝组织共培养的方法可体外促进AMSCs分化为肝细胞样细胞;外源性MSCs体内能够归巢到受损肝脏,并能通过分化有效地治疗小鼠急性肝损伤。本研究为急性肝损伤的有效治疗和修复等提供新的实验模型和依据,为肝脏疾病或肝损伤的干细胞治疗提供细胞来源,为临床治疗肝脏疾病提供一条新途径。
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