【摘 要】
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本研究对马疫链球菌诱变后,筛选出不产溶血素的透明质酸(hyaluronicacid,简称HA)高产菌株,优化了发酵条件,并初步确定提取工艺,为今后深入研究奠定了一定基础。 经NTG诱变,筛选
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本研究对马疫链球菌诱变后,筛选出不产溶血素的透明质酸(hyaluronicacid,简称HA)高产菌株,优化了发酵条件,并初步确定提取工艺,为今后深入研究奠定了一定基础。
经NTG诱变,筛选出不产生溶血素的菌株,多次诱变后得到相对较高产量的菌株。
最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母膏和牛肉膏的混合氮源,酵母膏和牛肉膏的比值为4∶1,最佳碳氮比为2∶1,葡萄糖最佳浓度为45g/L,牛肉膏和酵母膏总浓度为22.5g/L,MgSO4浓度为1.5g/L,NaHCO3浓度为7g/L,最佳温度为36℃,PH为7.0,接种量为13%,装液量为40%,发酵时间为42h.在0-16h,摇瓶转速为150r/m,16-30h转速为200r/m,30-42h为300r/m,起始葡萄糖的加入量为35g/L,在16-30h加入15g/L的葡萄糖,30-42h加入5g/L的葡萄糖,透明质酸的产量达到0.825g/L。
提取透明质酸时,无水乙醇的最佳添加量为3.25L/L,乙醇静置时间为20h,在分级分离纯化透明质酸时,最佳的NaCl浓度为0.35mol/L,除去蛋白的最佳的氯仿用量1.5L/L。
紫外和红外光谱分析鉴定了精制的样品,测定纯度为65%,其分子量为1.01×106。在5L发酵罐中发酵,透明质酸产量达到了0.952g/L。
发酵法生产透明质酸研究所用的出发菌株为兽疫链球菌,本研究采用马疫链球菌作为出发菌株具有较高的创新意义。透明质酸的产量从0.42g/L增加到0.952g/L,达到出发菌株的2倍多,分子量也较高,所做工作为今后的深入研究奠定了坚实的基础。
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