论文部分内容阅读
研究背景:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是众多心脑血管疾病共同病理基础,是心脑血管疾病中最常见的一种。AS是始于动脉内膜的疾病,其发病机制众说纷纭。高血压、高血脂、吸烟、糖尿病、肥胖是与其相关的危险因素。近年炎症学说的提出与建立为AS的研究指明了方向。油酰乙醇胺(N-oleoyl ethanolamine,OEA)是一种天然存在于体内的脂肪酸乙醇胺类化合物,是过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPARα)的激动剂之一。我们实验室前期实验发现,OEA能通过激活PPARα,抑制Toll样受体4(TLR4)的表达,从而降低脂多糖(LPS)诱导的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)的炎症反应。但OEA具体的抗炎机制尚不明确。N-(Z)-9-十八烯基-2-丙磺酰胺(Propane-2-sulfonicacid octadec-9-enyl-amide,N15)是我们自主设计合成的具有PPARα激动作用且口服吸收性好的OEA类似物。前期实验结果显示N15对血管内皮细胞的粘附因子VCAM-1、ICAM-1等表达情况起到抑制作用,对动脉粥样硬化的早期防治具有重要意义。但其具体的抗炎机制尚不明确,因此本文对N15以及OEA的抗炎作用展开了研究。目的:研究N15与OEA的抗炎机制。方法:1.探究N15的抗炎机制:THP-1细胞给予不同浓度的N15预保护处理,然后用LPS诱导THP-1细胞炎症反应,利用Western Blot、荧光定量PCR等实验技术检测TLR4和NF-λB信号通路相关炎症蛋白的表达。2.探究OEA的抗炎机制:(1)体内实验:通过给APOE-/-基因敲除鼠注射血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)建立动脉粥样硬化模型。选用雄性2个月大的 APOE-/-基因敲除鼠,随机分为 Control 组、Model 组、OEA30(OEA-30mg/kg)组,给药30天后取血管,将血管切片观察以及用Western Blot技术检测炎症蛋白的表达。(2)体外实验:将THP-1细胞用PMA刺激贴壁,然后给予不同浓度的OEA预保护处理,用LPS诱导THP-1细胞炎症反应,利用Transwell小室实验观察THP-1细胞的迁移现象以及用Western Blot、荧光定量PCR等技术检测炎症蛋白的表达。结果:1.N15抑制了 LPS诱导的THP-1细胞中TLR4、NF-κB的激活以及STAT3的磷酸化水平。在沉默PPARα基因后,N15对TLR4、NF-κB、STAT3磷酸化的抑制作用减弱。2.OEA能减少主动脉内膜增生,减少THP-1单核细胞向巨噬细胞的迁移,能增强AMPK的磷酸化并抑制磷酸化STAT3的表达。将AMPK以及PPARα沉默后,OEA抑制THP-1单核细胞向巨噬细胞的迁移作用减弱,并且对增强AMPK磷酸化以及抑制STAT3磷酸化作用减弱。实验结论:1.在LPS诱导的THP-1细胞中,N15是通过抑制TLR4以及下游的NF-κB、STAT3信号通路来发挥抗炎作用。2.OEA可以通过减少单核细胞向巨噬细胞的迁移、提高AMPK的磷酸化和PPARα的表达以及抑制STAT3的磷酸化发挥抗炎以及抗动脉粥样硬化作用。