论文部分内容阅读
肝硬化(cirThosis of liver)是消化系统的常见病，水代谢紊乱是肝硬化的突出临床特征，腹水是肝硬化水代谢紊乱的常见表现形式，也是肝硬化失代偿期最突出的临床表现。
目前，普遍认为水钠潴留是腹水发生的重要因素。而在肾脏，近球小管主动重吸收近70％的钠，伴随钠的重吸收，滤液中65％～70％的水份也被重吸收；另外，10％的水份在髓袢、10％的水份在远曲小管、10％～20％的水份在集合管被重吸收。因此，肾脏对水钠重吸收量的变化与肝硬化水代谢紊乱及腹水的形成密切相关。研究证实，肝硬化时，包括血管加压素(vasopressin，AVP)水平增高在内的多种因素作用于肾脏，使肾脏对水重吸收增加，导致肝硬化病人体内水的过量产生，腹水发生。在这一过程中，水的转运是关键环节。
水通道蛋白(aquaporins，AQPs)是一族细胞膜上选择性高效转运水分子的特异孔道，迄今已发现11个水通道蛋白，分别命名为AQP0～AQP10。AQP1、2、3、4、6、7、8在肾脏均有表达。其中，AQPl大量分布在近曲小管上皮细胞刷状缘与基膜侧的内折处、髓袢降支细段及髓袢伴行的血管内皮中，组成了大约4％近曲小管刷状缘膜蛋白，参与近90％水的重吸收。AQP2是仅存于肾脏集合管主细胞胞浆内囊泡和顶质膜的水通道，又称为集合管水通道蛋白(collecting ductaquaporin，AQP-CD)。AQP2在尿液浓缩和稀释过程中起决定作用，约有10％的肾小球滤过液流经集合管时是在AQP2的参与下被重吸收的。故AQP1、2在调节肾脏水平衡中发挥重要作用。因此，在肝硬化水代谢平衡紊乱及腹水的发生机制中，肾脏AQP1、2的作用不容忽视。但目前关于肝硬化时肾脏AQP1、2表达变化的研究尚少，而且不同肝硬化动物模型，AQP1、2表达的报道也不尽相同，尤其是胆总管结扎(bileduct ligation，BDL)大鼠AQP1、2表达变化的研究报道更少。本实验拟通过BDL大鼠肝硬化模型，研究肝硬化进程中肾脏组织AQP1、2表达的变化，以探讨AQP1、2与肝硬化腹水发生的关系，可能有助于寻求治疗腹水的新途径。
目的：探讨BDL大鼠肝硬化不同阶段肾组织中AQP1、2表达的变化以及肝硬化大鼠有、无腹水时肾组织AQP1、2表达的变化。
方法：采用BDL胆汁淤积性大鼠肝硬化模型，将50只雄性Sprague Dawley大鼠随机分成假手术组、1 wk模型组、2 wk模型组、3 wk模型组与4 wk模型组，共5组，每组lO只。模型组分别于结扎后1 wk、2 wk、3 wk、4 wk麻醉动物，假手术组与4 wk模型组同批麻醉。留取大鼠肝组织及肾脏组织标本固定待测。肝组织采用髓染色、Masson三色染色确定模型建立情况；肾脏组织标本采用HE染色，光镜下观察组织学变化，应用免疫组织化学方法测定AQP1、2的表达以及在肝硬化不同阶段肾组织中表达的变化。
结果：①胆汁淤积性大鼠肝硬化模型成功建立：HE及Masson三色染色显示，假手术组肝小叶结构完整，肝板排列整齐。模型组随着肝硬化逐渐发展，出现肝脏广泛结缔组织增生，中央静脉周围出现胶原纤维沉积，肝小叶结构紊乱甚至形成假小叶。②肝硬化大鼠肾脏病理组织学变化：HE染色显示，大鼠肝硬化进程中，肾脏病理组织学变化不明显。③AQP1、2在肾皮质、髓质表达的变化：免疫组织化学染色显示，肝硬化进程中，无论在肾皮质，还是肾髓质，AQP1、2表达均逐渐增强。造模1 wk～4 wk大鼠肾组织AQP1的阳性染色平均光密度值(皮质0.2035±0.0732，0.2433±0.0631，0.2647±0.0572，0.3051±0.0431；髓质0.1998±0.0394，0.2105±0.0467，0.2151±0.0433，0.2566±0.0214)均高于假手术组(皮质0.1848±0.0836；髓质0.1815±0.0394)，P<0.05；AQP2的阳性染色平均光密度值(皮质0，4703±0.0313，0.4832±0.0212，0.5081±0.0417，0.6802±0.0531；髓质0.4320±0.0237，0.4724±0.0284，0.4796±0.0451，0.5187±0.0612)均高于假手术组(皮质0.4197±0.0295；髓质0.4139±0.0152)，P<0.05。④AQP1、2表达与腹水发生的关系：肝硬化腹水组与肝硬化无腹水组比较，AQP1、2表达显著增强：腹水组大鼠肾组织AQP1的阳性染色平均光密度值(皮质0.2457±0.0341，髓质0.2149±0.0357)显著高于无腹水组(皮质0.1914±0.0267，髓质0.2149±0.0357)，P<0.05；腹水组AQP2的阳性染色平均光密度值(皮质0.5536±0.0476，髓质0.4764±0.0536)显著高于无腹水组(皮质0.4233±0.0521，髓质0.4158±0.0413)，P<0.05。
结论：以BDL法制备的大鼠肝硬化模型中存在着肾脏AQP1及AQP2的全面上调，提示在肝硬化进程中，近曲小管、髓襻降支细段、集合管可能均参与了水重吸收的增加。